Summary
The electron microscopic appearances of rabbit pancreas β-cells takenin vivo and afterin vitro incubation have been compared and the effects of high glucose and tolbutamide stimulation of insulin releasein vitro on β-cell cytomorphology investigated. Normal structure was maintained onin vitro incubation in a proportion of β-cells; this varied in different samples from 35–100 per cent. The cause of this variation was not apparent but it was not influenced by the time of incubation, medium glucose concentration or tolbutamide. Quantitative measurements have been made of the proportion of β-cell profiles showing marginal distribution of granules, of the number of contacts between granule sac membranes and the plasma membrane, of the number of granule sacs showing perforations, of the population density of specific secretion granules, lysosomes and autophagic bodies, and estimates have been made of the extent of the Golgi apparatus in cross section. No consistent change in these parameters was observed following stimulation of insulin release with glucose or tolbutamide. There was no evidence in any of the specimens examined of continuity between the interior of a granule sac and the outside of a β-cell. Calculations based on the rate of release of insulin and the insulin content of the pancreas indicate that the chance of visualising granule extrusion by electron microscopy is small. The significance of these results in relation to the emiocytosis theory of insulin release (Lacy andHartroft) is discussed.
Résumé
On a comparé l'aspect au microscope électronique des cellules bêta de pancréas de lapin prélevésin vivo et après incubationin vitro, et on a étudié les effets, sur la cytomorphologie de la cellule bêta, de la stimulation de la libération d'insulinein vitro par un taux élevé de glucose et par le tolbutamide. Une partie des cellules bêta conservait sa structure normale au cours de l'incubationin vitro; ceci variait dans les différents échantillons de 35 à 100 pour cent. La cause de cette variation n'était pas apparente, mais elle n'était pas influencée par la durée de l'incubation, ni par la concentration du milieu en glucose, ni par le tolbutamide. On a fait des mesures quantitatives de la proportion de profils de cellules bêta, présentant une distribution marginale des granules, du nombre de contacts entre les membranes des sacs granulaires et la membrane plasmatique, du nombre de sacs granulaires présentant des perforations, de la densité de population des granules spécifiques de sécrétion, des lysosomes et des corps autophagiques, et on a fait des estimations de l'étendue de l'appareil de Golgi dans les coupes transversales. On n'a pas observé de modifications constantes dans ces paramètres après stimulation de la libération d'insuline par le glucose ou le tolbutamide. Dans aucun des spécimens examinés il n'y avait de signe de continuité entre l'intérieur d'un sac granulaire et l'extérieur d'une cellule bêta. Des calculs basés sur le taux de libération d'insuline et sur le contenu en insuline du pancréas, indiquent qu'il y a peu de chance de visualiser l'extrusion d'un granule au microscope électronique. L'importance de ces résultats en relation avec la théorie d'émiocytose de la sécrétion d'insuline (Lacy andHartroft) est discutée.
Zusammenfassung
Das elektronenoptische Bild von β-Zellen ausin vivo entnommenem Kaninchenpankreas wurde vor und nachin vitro Inkubation verglichen und die Auswirkungen der invitro durch Glucose und Tolbutamid herbeigeführten Insulinfreisetzung auf die β-Zell-Zytomorphologie untersucht. Ein Teil der β-Zellen behielt auch nachin vitro Inkubation seine normale Struktur; dieser Anteil schwankte in den verschiedenen Ansätzen zwischen 35 und 100%. Die Ursache dieser Schwankungen ließ sich nicht nachweisen. Die Inkubationsdauer und die Glucose- oder Tolbutamidkonzentration im Medium hatten keinen Einfluß darauf. Quantitativ bestimmt wurden: Der Anteil der β-Zellprofile, die eine randständige Granulaverteilung aufwiesen; die Anzahl der Kontakte zwischen Granula- und Plasmamembran; die Anzahl der Granula, die Perforationen aufwiesen; die Bevölkerungsdichte spezifischer Sekretionsgranula und die Zahl der Lysosomen und Autophagen. Ferner wurde die Ausprägung des Golgi-Apparates in den einzelnen Schnitten geschätzt. Nach Anregung der Insulinfreisetzung durch Glucose oder Tolbutamid wurden keine konstanten Änderungen dieser Parameter beobachtet. In keinem der untersuchten Präparate ließ sich eine Verbindung zwischen dem Inneren eines Granula-Sackes und der Umgebung der Zelle nachweisen. Berechnungen, die sich auf die Insulinfreisetzungsrate und auf den Insulingehalt des Pankreas stützen, ergeben allerdings nur eine geringe Wahrscheinlichkeit dafür, daß sich ein Granulaaustritt elektronenmikroskopisch darstellen läßt. Die Bedeutung dieser Ergebnisse in Bezug auf die Emiozytose-Theorie der Insulinfreisetzung (Lacy undHartroft) wird besprochen.
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Findlay, J.A., Gill, J.R., Irvine, G. et al. Cytology of β-cells in rabbit pancreas pieces incubatedin vitro; Effects of glucose and tolbutamide. Diabetologia 4, 150–160 (1968). https://doi.org/10.1007/BF01219436
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