Summary
The effect of bovine proinsulin and related factors on the glucose metabolism of isolated, rat, fat cells was studied. The dose-response curve of proinsulin was parallel to that of insulin and the action of the two proteins showed an identical time course. The activity of single chain proinsulin was about 0.5 U/mg (as estimated from its ability to increase the conversion of14C-glucose to14CO2 or to14C-glycerides by fat cells) and rose to about 17 U/mg after treatment with trypsin. — The activity of insulin was quantitatively recovered in the presence of proinsulin. Split chain proinsulin showed an activity of 5 U/mg, which rose to about 18 U/mg after treatment with trypsin. Connecting peptide did not influence the glucose metabolism in the absence or presence of insulin. — There was no conversion of proinsulin in the isolated cell incubation medium to insulin or a similar molecule with high biological activity. The activity was the same on rat epididymal fat pads as on isolated fat cells, and there was no significant suppression by Kunitz pancreatic trypsin inhibitor in either system. — The following was concluded: the biological activity of proinsulin on rat isolated fat cells and epididymal fat pads is about 2 per cent of that of insulin, and the effect is caused by the proinsulin molecule itself. The reason for the low biological activity is presumably a smaller affinity for insulin receptors.
Résumé
L'effet de la proinsuline bovine et de facteurs analogues sur le métabolisme glucidique de cellules adipeuses isolées de rat a été étudié. La courbe dose-réponse de la proinsuline était paralléle à celle de l'insuline et l'action des deux protéines montrait une évolution dans le temps identique. L'activité de la proinsuline à chaîne unique était d'environ 0.5 U/mg (calculée d'aprés sa capacité à augmenter la conversion de glucose-14C en14CO2 ou en glycérides14C par des cellules adipeuses) et montait à environ 17 U/mg aprés traitement avec de la trypsine. L'activité de l'insuline a été retrouvée quantitativement en présence de pro insuline. Laproinsuline à chaîne rompue montrait une activité de 5 U/mg qui s'élevait à 18 U/mg aprés traitement par la trypsine. Le polypeptide de connexion n'influençait pas le métabolisme glucidique avec ou sans insuline. Dans le milieu d'incubation, il n'y avait pas de conversion de proinsuline en insuline ou en une molécule comparable avec une activité biologique élevée. L'activité était la même avec du tissu adipeux épididymaire de rat qu'avec des cellules adipeuses isolées et il n'y avait pas de suppression significative par l'inhibiteur de trypsine pancréatique de Kunitz dans aucun des deux systémes. Nous sommes arrivés aux conclusions suivantes: L'activité biologique de la proinsuline sur des cellules adipeuses isolées du rat et sur le tissu adipeux épididymaire correspond à environ 2% de celle de l'insuline et l'effet est causé par la molécule de proinsuline elle-même. La raison pour cette activité biologique basse est probablement une affinité réduite pour les récepteurs de l'insuline.
Zusammenfassung
Die Wirkung von Rinderproinsulin und verwandter Faktoren auf den Glucosestoffwechsel von isolierten Ratten-Fettzellen wurde untersucht. Die Dosis-Wirkungskurve von Proinsulin verlief parallel zu der von Insulin, und die Einwirkung beider Proteine zeigte einen identischen Zeitablauf. Die Aktivität von einkettigem Proinsulin betrug etwa 0.5 E/mg (wie aus seiner Fähigkeit geschlossen wurde, die Umwandlung von14C-Glucose in14CO2 oder14C-Glyceride in Fettzellen zu steigern), und erhöhte sich nach Trypsinbehandlung a,uf etwa 17 E/mg. — In Gegenwart von Proinsulin ließ sich die Aktivität von Insulin quantitativ wiederfinden. Proinsulin mit gesprengter Kette wies eine Aktivität von 5 E/mg auf, die nach Trypsinandauung auf 18 E/mg anstieg. C-Peptid beeinflußte den Glucosestoffwechsel weder mit noch ohne Insulinzusatz. — In der Inkubationsflüssigkeit von isolierten Zellen ließ sich keine Umwandlung von Proinsulin in Insulin oder ein ähnliches Molokül mit hoher biologischer Aktivität nachweisen. Aktivitätsmessungen am Ratten-Nebenhoden-Fettgewebsanhang erbrachten die gleichen Resultate wie an isolierten Fettzellen, und der Kunitz-Pankreas-Trypsin-Inhibitor führte in keinem der beiden Systeme zu einer signifikanten Hemmung. — Es wurden folgende Schlüsse gezogen: Proinsulin weist an isolierten Ratten-Fettzellen und am epididymalen Fettgewebsanhang der Ratte etwa 2% der biologischen Aktivität von Insulin auf, und der Effekt wird durch das ProinsuIin-Molekül selbst hervorgerufen. Der Grund für die niedrige biologische Aktivität ist vermutlich in einer geringeren Affinität zu den Insulin-Receptoren zu suchen.
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References
Brandenburg, D., Biela, M., Herbertz, L., Zahn, H.: Über den Einfluß von chemischen Veränderungen am Aminoende der Insulinketten auf die biologische Aktivität des Hormons. 5th European association for the study of diabetes, Abstract no. 20 (1969).
Chance, R.E., Ellis, R.M., Bromer, W.W.: Porcine proinsulin: characterization and amino acid sequence. Science161, 165–167 (1968).
Gliemann, J.: Assay of insulin-like activity by the isolated fat cell method. I. Factors influencing the response to crystalline insulin. Diabetologia3, 382–388 (1967).
—: Glucose metabolism and response to insulin of isolated fat cells and epididymal fat pads. Acta physiol. scand.72, 481–491 (1968).
Grant, P.T., Reid, K.B.M.: Biosynthesis of an insulin precurser by islet tissue of cod (Cadus.Canarias). Biochem. J.110, 281–288 (1968).
Puls, W., Kroneberg, G.: Experimentelle Untersuchungen über die blutzuckersenkende Wirkung von Rinder-proinsulin. Diabetologia5, 325–330 (1969).
Roth, J., Gordon, P., Pastan, I.: “Big insulin”. A new component of plasma insulin detected by immunoassay. Proc. nat. Acad. Sci.61, 138–145 (1968).
Rubenstein, A.H., Cho, S., Steiner, D.F.: Evidence for proinsulin in human urine and serum. Lancet1968 I, 1353–1355.
Rubenstein, A.H., Melani, F., Pilkis, S., Steiner, D.F.: Proinsulin. Secretion, metabolism, immunological and biological properties. Postgrad. med. J.45, suppl. (1969).
Shaw, W.N., Chance, R.E.: Effect of porcine proinsulin in vitro on adipose tissue and diaphragm of the normal rat. Diabetes17, 737–745. (1968).
Steiner, D.F.: Evidence for a precurser in the biosynthesis of insulin. Trans. N.Y. Acad. Sci.30, 60–68 (1967).
—, Clark, J.F.: The spontaneous reoxidation of reduced beef and rat proinsulins. Proc. nat. Acad. Sci.60, 622–626 (1968).
—, Cunningham, D., Spigelmann, L., Aten, B.: Insulin biosynthesis: Evidence for a precurser. Science157, 697–700 (1967).
—, Hallund, O., Rubenstein, A., Cho, S., Bayliss, C.: Isolation and properties of proinsulin, intermediate forms, and other minor components from crystalline bovine insulin. Diabetes17, 725–736 (1968).
—, Oyer, P.: The biosynthesis of insulin and a probable precurser of insulin by a human islet cell adenoma. Proc. nat. Acad. Sci.57, 473–480 (1967).
Wang, S.S., Carpenter, F.H.: A compositional assay for insulin applied to a search for proinsulin. J. biol. Chem.240, 1619–1625 (1965).
Yip, C.C., Lin, B.J.: Amino acid composition of bovine proinsulin. Biochem. biophys. Res. Commun.29, 382–387 (1967).
—, Logothetopoulos, J.: A specific antiproinsulin serum and the presence of proinsulin in calf serum. Proc. nat. Acad. Sci.62, 415–419 (1969).
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Gliemann, J., Sørensen, H.H. Assay of insulin-like activity by the isolated fat cell method IV. The biological activity of proinsulin. Diabetologia 6, 499–504 (1970). https://doi.org/10.1007/BF01211891
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