Isolierung und Charakterisierung eines neuen plazentaspezifischen Proteins (PP₁₂)

Summary

PP₁₂ was isolated from aqueous extracts of human term placentae by fractionating the proteins with rivanol and ammonium sulfate, gel filtration, ion-exchange chromatography and the use of immunoadsorbents.

An average of 5 mg PP₁₂ could be extracted from a human term placenta. In extracts from other human tissues this protein could not be detected; PP₁₂ therefore appears to be a protein specific for the placenta.

In cord blood sera and in sera of pregnant women PP₁₂ was absent or present only in trace amounts (< 0.1 mg/100 ml). However, PP₁₂ occured in higher concentrations in amniotic fluid; the maximal values being found between the 20th and 30th week of pregnancy with an average of 11 mg/100 ml.

PP₁₂ had the electrophoretic mobility of an α₁-globulin and an isoelectric point of 4.6–4.7. The purified protein sedimented with 2.7 S. PP₁₂ was found to have a molecular weight of 25,200 as determined by ultracentrifugation, but a molecular weight of 51,000 as determined by SDS-PAA gel electrophoresis.

PP₁₂ is a glycoprotein and contains 4.3% carbohydrates (hexoses 2.8%, hexosamines 0.7%, fucose 0.03%, sialic acid 0.8%). The amino acid composition of PP₁₂ has also been determined. The most abundant amino acids in this protein are glutamic acid, alanine, serine, and proline. p ]The molecules of PP₁₂ are heterogeneous in size and charge. On immunizing animals with PP₁₂ antisera binding with two quite different antigenic determinants were obtained. Proteins with a close immunochemical relation to PP₁₂ occurred in very high concentrations in the placentae of rhesus (cynomolgus) monkeys.

Zusammenfassung

PP₁₂ wurde aus dem wäßrigen Extrakt reifer menschlicher Plazenten isoliert; die Reinigung erfolgte durch fraktionierte Fällung der Proteine mit Rivanol und Ammoniumsulfat, durch Gelfiltration, Ionenaustauschchromatographie und unter Verwendung von Immunadsorbentien. Aus einer ausgewachsenen menschlichen Plazenta lassen sich im Durchschnitt 5 mg PP₁₂ extrahieren. Im Extrakt von anderen menschlichen Organen konnte dieses Protein nicht nachgewiesen werden; PP₁₂ ist demnach offensichtlich spezifisch für die Plazenta. In Nabelschnurseren und in Seren schwangerer Frauen kommt PP₁₂ normalerweise nicht oder nur in Spuren (< 0,1 mg/100 ml) vor. In größerer Konzentration wird PP₁₂ im Fruchtwasser gefunden; die höchsten Werte werden dabei zwischen der 20. und 30. Woche der Schwangerschaft mit durchschnittlich 11 mg/100 ml gefunden.

PP₁₂ hat die elektrophoretische Beweglichkeit eines α₁-Globulins und einen isoelektrischen Punkt von 4,6–4,7. Das gereinigte Protein sedimentiert mit 2,7 S. In der Ultrazentrifuge wurde für PP₁₂ ein Molekulargewicht von 25 200, im SDS- haltigen Polyacrylamidgel dagegen ein Molekulargewicht von 51 000 ermittelt.

PP₁₂ ist ein Glykoprotein und enthält 4,3% Kohlenhydrate (Hexosen 2,8%, Hexosamine 0,7%, Fucose 0,03%, Neuraminsäure 0,8%). Die Aminosäurenzusammensetzung des Proteins wurde ebenfalls ermittelt; die in der Peptidkette am häufigsten Aminosäuren sind Glutaminsäure, Alanin, Serin und Prolin.

PP₁₂ ist ein hinsichtlich der Größe und Ladung der Moleküle heterogenes Protein. Beim Immunisieren von Tieren mit PP₁₂ werden meist Antikörper gegen 2 recht unterschiedliche Antigendeterminanten erhalten. Mit PP₁₂ immunologisch nah verwandte Proteine kommen in sehr hoher Konzentration in Plazenten von Affen (Rhesus und Cynomolgus) vor.