The isolation of chondroitin 4-[³⁵S]sulphate from the molar teeth of young rats receiving sodium[³⁵S]sulphate

Abstract

Six-weeks-old Wistar rats were injected intraperitoneally with sodium [³⁵S]sulphate. The animals were sacrificed after 1 h and the molar teeth were extracted. The pulp and dentine were isolated by differential flotation and examined for glycosaminoglycans following decalcification and proteolysis. Examination of the product by cellulose acetate electrophoresis revealed the presence of a single metachromatic component which was radioactive. Chemical analysis, infrared spectroscopy and enzymic susceptibility identified the product as chondroitin 4′ sulphate. The results provide direct chemical evidence that sodium [³⁵S]sulphate is rapidly incorporated into the sulphated glycosaminoglycans of the organic matrix of the rat molar tooth and that this tissue is a useful model for investigating the metabolism of the connective tissue ground substance.

Résumé

Des rats Wistar, âgés de six semaines, sont injectés par voie intrapéritonéale avec du (³⁵S) sulfate de sodium. Les animaux sont sacrifiés après 1 h et les molaires sont extraites. La pulpe et le dentine sont isolées par flottation différencielle et les glycosaminoglycanes sont étudiés après décalcification et protéolyse. L'étude du produit par électrophorèse sur acétate de cellulose montre la présence d'un composant métachromatique simple qui est radioactif. Des analyses chimiques, la spectroscopie infra-rouge et la réactivité aux enzymes permettent d'identifier le produit comme du sulfate 4′ chondroitine. Les résultats apportent une preuve chimique directe de l'incorporation rapide du (³⁵S) sulfate de sodium dans les glycosaminoglycanes sulfatés de la matrice organique de molaires de rats. Ce tissu est un modèle intéressant pour l'étude du métabolisme de la substance fondamentale du tissu conjonctif.

Zusammenfassung

Sechs Wochen alte Wistar-Ratten erhielten Natrium-[³⁵S]-Sulfat intraperitoneal. Die Tiere wurden 1 Std nach der Injektion getötet, und ihre Backenzähne wurden extrahiert. Pulpa und Dentin wurden mittels der Differential-Flotation isoliert und auf Glycosaminoglycane nach Entkalkung und Proteolyse untersucht. Die Prüfung des Produktes mittels Zellulose-Acetat-Elektrophorese zeigte die Anwesenheit einer einzigen metachromatischen Komponente, welche radioaktiv war. Chemische Analyse, Infrarot-Spektroskopie und enzymatische Spaltbarkeit erlaubten die Identifikation des Produktes als Chondroitin-4′-Sulfat. Die Resultate liefern den direkten chemischen Beweis, daß Natrium-[³⁵S]-Sulfat rasch in die sulfatierten Glycosaminoglycane der organischen Matrix der Ratten-Backenzähne eingebaut wird und daß dieses Gewebe ein nützliches Modell ist, um den Stoffwechsel der Grundsubstanz des Bindegewebes zu untersuchen.