Die Bedeutung der Hydrolyse-Art in der Feulgen-Cytophotometrie von Kernen mit unterschiedlichen Ploidiegraden

Summary

In smears of liver parenchyme cells of the white mouse (fixation with Lillie's fluid; ethanol, formalin, acetic acid) DNA was determined Feulgen-cytophotometrically, and that comparatively after the conventional heat hydrolysis (N HCl, 60°C) as well as the “longtime” hydrolysis with 5N HCl at 20°C. With the heat hydrolysis the optimum was found between 8 and 10 min, and this uniformly in nuclei of all stages of ploidy (2n, 4n, 8n, 16n). Thus, the formation of reactive aldehyde groups as well as the subsequent extraction of hydrolized DNA are independent of the different structure and/or the concentration of the chromatin of the nuclei with different ploidy. With the long-time hydrolysis in all types of nuclei a wide plateau between 30 and 60 min was found. With both methods of hydrolysis karyograms exactly reveal the different stages of ploidy. However, the measuring values after long-time hydrolysis are 20–30% higher than those after heat hydrolysis. In the latter case it should be clear that the processes of hydrolysis and of extraction overlap. Therefore, in cases of quantitative DNA determinations the long-time hydrolysis should be prefered. Especially, when comparing different tissues, it is important that the position of the optimum of hydrolysis is not critical.

Zusammenfassung

An Ausstrichen von Leberparenchymzellen der weißen Maus (Fixierung nach Lillie; Äthanol, Pormol, Eisessig) wurde Feulgen-cytophotometrisch die DNS bestimmt, und zwar vergleichsweise nach der klassischen Hitzehydrolyse (n HCl, 60°C) sowie nach der „Langzeit“-Hydrolyse mit 5n HCl bei 20°C. Bei der Hitzehydrolyse liegt das Hydrolyse-Optimum zwischen 8 und 10 min, und zwar einheitlich bei Kernen aller Ploidiestufen (2n, 4n, 8n, 16n). Die Bildung reaktiver Aldehydgruppen sowie die spätere Extraktion von hydrolysierter DNS bei Überhydrolyse sind also unabhängig von der unterschiedlichen Struktur bzw. Chromatindichte der Kerne verschiedener Ploidiegrade. Bei der Langzeithydrolyse findet sich bei allen Kerntypen ein breites Plateau zwischen 30 und 60 min. Karyogramme lassen bei beiden Hydrolyse-Methoden exakt die verschiedenen Ploidiestufen der Kerne erkennen. Jedoch liegen die Meßwerte nach der Langzeithydrolyse um 20–30% höher als nach der Hitzehydrolyse. Offenbar überlappen sich bei letzterer die Prozesse Hydrolyse und Extraktion. Daher gebührt der Langzeithydrolyse für quantitative DNS-Bestimmungen der Vorzug. Besonders beim Vergleich verschiedener Gewebe ist von Wichtigkeit, daß die Lage des Hydrolyse-Optimums nicht kritisch ist.