Evaluation of Agar Gel Double Diffusion Test for Detection of Nuclear Polyhedrosis Virus of Silkworm, Bombyx mori L.

Abstract

The agar gel double diffusion test was evaluated for detection of nuclear polyhedrosis virus infecting the silkworm, Bombyx mori L. (BmNPV). The test was successful using alkali-dissolved BmNPV as antigen. The antiserum raised against dissolved BmNPV gave positive results with a wider range of antigenic concentrations compared to antiserum raised against undissolved BmNPV. Gel plates prepared using phosphate buffered-saline as dissolving medium for agarose gave sharper and clearer precipitation bands compared to those made with sodium carbonate-saline as diluent. Sharp bands were obtained when the experiment was carried out at 25°C, whereas at higher temperature (35°C), the bands were diffused. The test was able to detect antigen concentration as low as 2 × 10⁶ OBs/ml (18.9 μg/ml of antigen protein).

Résumé

Le test de double diffusion en gel d’agar a été évalué pour la détection du virus à polyhédrose nucléaire infectant le ver à soie, Bombyx mori L. (BmNPV). Le test a réussi en utilisant le BmNPV en solution basique comme antigène. L’antisérum produit centre le BmNPV dissous a donné des résultats positifs avec une plus large gamme de concentrations antigéniques par rapport à l’antisérum produit par le BmNPV non dissous. Les plaques de gel préparées en utilisant une solution saline en tempon phosphate comme milieu dissolvent pour l’agarose a donné des bandes de précipitation plus nettes et plus claires par rapport à celles produites avec le sel de phosphate de sodium comme diluant. De bandes nettes étaient obtenues quand l’expérience se déroulait à 25°C, alors qu’à plus haute température (35°C), les bandes étaient diffuses. Le test pouvait détecter l’antigène jusqu’à une concentration aussi basse que 2 × 10⁶ OBs/ml (18.9 μg/ml de protéine antigénique).