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Vergleich von Parametern der zeitaufgelösten Autofluoreszenz bei Gesunden und Patienten mit früher AMD

Comparison of parameters of time-resolved autofluorescence between healthy subjects and patients suffering from early AMD

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Zusammenfassung

Hintergrund

Zur quantitativen Beurteilung früher Veränderungen bei altersbedingter Makuladegeneration, die im zellulären Stoffwechsel vermutet werden, wurde ein Fluoreszenz Lifetime Mapper (FLM) erprobt.

Methode

Mit dem FLM wird die zeitaufgelöste Fundusfluoreszenz mit Pikosekunden-Laserpulsen bei 448 nm angeregt. Diese wird in 2 Spektralbereichen (K1=490–560 nm, K2=560–700 nm) durch zeitkorreliertes Einzelphotonenzählen detektiert. Der zeitabhängige Abfall der Fluoreszenzintensität wird mit 3 Abklingzeiten approximiert. Die ermittelten Abklingzeiten ermöglichen einen Vergleich mit endogenen Fluorophoren des zellulären Stoffwechsels.

Ergebnisse

Für 8 Gesunde wurden erstmalig die Mittelwerte der Abklingzeiten der Autofluoreszenz bestimmt (K1: τ1=118 ps, τ2=584 ps, τ3=2826 ps, K2: τ1=104 ps, τ2=477 ps, τ3=1623 ps). Bei 15 Patienten mit AMD (AREDS Kategorien I und II) wurden längere Abklingzeiten (K1: τ1=166 ps, τ2=986 ps, τ3=3309 ps, K2: τ1=137 ps, τ2=583 ps, τ3=1924 ps) ermittelt. Mit den Parametern 1 und 2 im kurzwelligen Kanal sind Augengesunde und Patienten bereits im Frühstadium der AMD signifikant trennbar. Fluorophorspezifische Veränderungen in der Makula konnten an Einzelbeispielen bei fortgeschrittener AMD demonstriert werden.

Schlussfolgerung

Messungen im 30-Grad-Fundusfeld zeigen, dass bereits im Frühstadium der AMD spezifische Änderungen auch außerhalb der Makula vorliegen. Diese wirken auch in der neuronalen Retina, der τ2 zugeordnet werden kann. Verlängerungen der Lifetime τ2 im kurzwelligen Kanal können zumindest teilweise auf eine Zunahme von an Protein gebundenem NADH zurückgeführt werden, dessen Anteil bei verringerter Zellatmung steigt.

Abstract

Background

A fluorescence lifetime mapper (FLM) was tested for quantitative estimation of early alterations in age-related macular degeneration (AMD) which are assumed to be in cellular metabolism.

Method

In FLM time-resolved autofluorescence of the fundus is excited by picosecond (ps) laser impulses at 448 nm and detected in 2 spectral ranges (K1=490–560 nm and K2=560–700 nm) by time-correlated single photon counting. The time-dependent decrease in fluorescence intensity was approximated using 3 decay rates. The calculated lifetimes allow a comparison with endogenous fluorophores of cellular metabolism.

Results

Initially mean lifetimes were determined for 8 healthy subjects (K1: τ1=118 ps, τ2=584 ps, τ3=2826 ps, K2: τ1=104 ps, τ2=477 ps, τ3=1623 ps). In 15 AMD patients (AREDS categories I and II) the lifetimes were longer (K1: τ1=166 ps, τ2=986 ps, τ3=3309 ps, K2: τ1=137 ps, τ2=583 ps, τ3=1924 ps). The best separation between healthy subjects and patients with early AMD was possible by parameters 1 and 2 in the short-wave channel. Fluorophore-specific alterations in the macula could be demonstrated in isolated cases with advanced AMD.

Conclusion

Measurements in the 30° fundus field demonstrated that specific alterations were already present even in early AMD and also outside the macula. These act in the neuronal retina, because parameter τ2 is related to this layer. Increases in the lifetime of parameter τ2 in the short wave channel could at least partially be determined by an increase of protein bound NADH, the content of which increases with reduced cellular respiration.

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Literatur

  1. AREDS report VIII (2001) Arch Ophthalmology 119(10):1417–1436

    Google Scholar 

  2. American National Standard for the safe use of laser ANSI Z 136.1-2000 (2000) Laser Institute of America, Suite 128, 13501 Ingenuite Drive, Orlando, Fl 32826

  3. Ben-Shabat S, Parish CA, Vollmer H et al (2002) Biosynthetic studies of A2E, a major Fluorophore of retinal pigment epithelial lipofuscin. J Biol Chem 277(9):7183–7190

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  4. Bindewald A, Bird AC, Dandekar SS et al (2005) Classification of fundus autofluorescence patterns in early age-related macular diseases. Invest Ophthalmol Vis Sci 46:3309–3314

    Article  PubMed  Google Scholar 

  5. Boettner EA, Wolter JR (1962) Transmission of the ocular media. Invest Ophthalmol Vis Sci 1:776–783

    Google Scholar 

  6. Bui TV, Han Y, Radu RA et al (2006) Characterization of native retinal fluorophores involved in biosynthesis of A2E and Lipofuscin-associated retinopathies. J Biol Chem 281(26):18112–18119

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  7. Chance B (1976) Pyridine nucleotides as an indicator of the oxygen requirements for energy-linked functions of mitochondria. Circ Res 38(5, Suppl 1):I31–I38

    Google Scholar 

  8. Cubeddu R, Taroni P, Hu DN et al (1999) Photophysical studies of A2E, putative precursor of lipofuscin, in human retinal pigment epithel cells. Photochem Photobiol 70(2):172–175

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  9. Eldred GE, Katz ML (1988) Fluorophores of the human pigment epithelium: Separation and spectral characterization. Exp Eye Res 47:71–86

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  10. Eldred GE, Lasky MR (1993) Retinal age-pigments generated by self-assembling lysosomotropic detergents. Nature 361:724–726

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  11. Fishkin NE, Sparrow JR, Allikmets R, Nakanishi K (2005) Isolation and characterization of a retinal pigment epithel cell fluorophore: an all-trans-retinal dimer conjugate. PNAS 102(20):7091–7096

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  12. Hammer M, Richter S, Kobuch K, Schweitzer D (2005) Lipofuscin accumulation in an organotypic perfusion culture of porcine fundi under oxidative stress and blue light Irradiation. Invest Ophthalmol Vis Sci 46:E-Abstract 251

    Google Scholar 

  13. Hammer M, Richter S, Kobuch K et al (2008) Intrinsic tissue fluorescence in an organotypic perfusion culture of the porcine ocular fundus exposed to blue light and free radicals. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 4246:979–988

    Article  Google Scholar 

  14. Jang YP, Matsuda H, Itagaki Y et al (2005) Characterization of peroxy-A2E and furan-A2E photooxidation products and detection in human and mouse retinal pigment epithel cell lipofuscin. J Biol Chem 280(48):39732–39739

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  15. Kayatz P, Thumann G, Luther T et al (2001) Oxidation causes melanin fluorescence. Invest Ophthalmol Vis Sci 42(1):241–246

    PubMed  CAS  Google Scholar 

  16. Kim SR, He J, Yanase E et al (2007) Characterization of dihydro-A2PE: an intermediate in the A2E biosynthetic pathway. Biochemistry 46(35):10122–10129

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  17. Lakowicz JR (2006) Principles of fluorescence spectroscopy. Third Edition. Springer Science Business Media, New York

  18. Lamb LE, Ye T, Haralampus-Grynaviski NM et al (2001) Primary photophysical properties of A2E in solution. J Phys Chem B 105(46):11507–11512

    Article  CAS  Google Scholar 

  19. Parish CA, Hashimoto M, Nakanishi K et al (1998) Isolation and one step preparation of A2E and iso-A2E, fluorophores from human retinal pigment epithelium. Prov Natl Acad Sci USA 95:14609–14613

    Article  CAS  Google Scholar 

  20. Schweitzer D, Jentsch S, Schenke S et al (2007) Spectral and time-resolved studies on ocular structures. In: Schweitzer D, Fitzmaurice M (eds) Diagnostic Optical Spectroscopy in Biomedicine IV. Progress in biomedical optics and imaging. 8, 41 SPIE/OSA Vol. 6628:662807–662811–662807–662812

  21. Schweitzer D, Schenke S, Hammer M et al (2007) Towards metabolic Mapping of the Human Retina. Microsc Res Tech 70:410–419

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

  22. Schweitzer D, Hammer M, Jentsch S, Schenke S (2007) Interpretation of measurements of dynamic fluorescence of the eye. Advanced Photon Counting Techniques II. In: Becker W (ed) SPIE Vol. 6771: 677108–677111–677108–677112

  23. Sparrow JR, Nakanishi K, Parish CA (2000) The lipofuscin fluorophore A2E mediates blue light-induced damage to retinal pigment epithelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci 41(7):1981–1989

    PubMed  CAS  Google Scholar 

  24. Wang Z, Keller LMM, Dillon J, Gaillard ER (2006) Oxidation of A2E results in the formation of highly reactive aldehydes and ketones. Photochem Photobiol 82:1251–1257

    Article  PubMed  CAS  Google Scholar 

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Interessenkonflikt

J. Fischer ist Mitarbeiter der Firma Heidelberg Engineering. Die anderen Autoren hatten kein finanzielles Interesse an der Ausführung der Studie.

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Correspondence to D. Schweitzer.

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Der Beitrag wurde in Teilen zur Tagung der Deutschen Ophthalmologischen Gesellschaft 2008 vorgetragen.

Der Aufbau des Demonstrators wurde von Heidelberg Engineering im Rahmen eines industriegeförderten Drittmittelprojektes unterstützt.

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Schweitzer, D., Quick, S., Schenke, S. et al. Vergleich von Parametern der zeitaufgelösten Autofluoreszenz bei Gesunden und Patienten mit früher AMD. Ophthalmologe 106, 714–722 (2009). https://doi.org/10.1007/s00347-009-1975-4

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