Chemical fractionation of immunosuppressive gamma-immunoglobulins from anti mouse-thymocyte serum (ATS)

Summary

IgG fractions with differing immunosuppressive activity were separated by repeated ion exchange chromatography on DEAE-Sephadex, using narrow salt gradients at constant pH. Charge differences, estimated by systematic disc electrophoresis of the column effluent, served as a parameter for pooling the fractions and characterizing the corresponding IgG species. 6 main fractions, each containing pure IgG in part and subsequently 4 highly purified subfractions were obtained. Differences of immunosuppressive activity were found in these fractions and a substantial enrichment of the specific immunosuppressive activity was achieved. Lymphocytotoxicity of the fractions having higher specific immunosuppressive activity was abolished, suggesting different factors to be responsible for these properties. Further, this suggested the possibility of eliminating undesirable side effects due to cytotoxic activity. Although the final yields were incommensurate with the 5% of the total IgG-population estimated to represent immunosuppressiverelevant antibodies, this approach may provide a promising technique for further purification.

Zusammenfassung

Aus Antithymocytenserum (ATS) gegen Mausthymocyten wurden 6 IgG-Fraktionen mit verschiedener spezifischer immunosuppressiver Aktivität durch wiederholte Ionenaustauscherchromatographie an DEAE-Sephadex gewonnen. Dabei wurden extrem flache Salzgradienten bei konstantem pH verwendet. Als Kriterium zur Bildung einheitlicher Fraktionen des Säuleneluates dienten, an Stelle des üblicherweise bestimmten Proteingehaltes, Ladungsunterschiede der in der Polyacrylamidelektrophorese dargestellten Gamma-G-Banden. Aus einer so gewonnenen reinen IgG-Fraktion gelang die Auftrennung von 4 verschiedenen Unterfraktionen mit einer bis auf das 30fache gesteigerten spezifischen immunosuppressiven Aktivität. Gleichzeitig wurde jegliche lymphocytotoxische Wirkung aus diesen IgG-Fraktionen eliminiert. Damit scheint eine Möglichkeit gegeben, aus ATG die gewünschte immunosuppressive Aktivität erheblich anzureichern und gleichzeitig die cytotoxische Komponente abzutrennen.