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Anwendung der analytischen Größenausschluß-Chromatographie zur Untersuchung des Substratahbaus einer kommerziellen Pektatlyase ausErwinia carotovora

Application of analytical size exclusion Chromatography to the investigation of substrate degradation by a commercial pectate lyase fromErwinia carotovora

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Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und Forschung Aims and scope Submit manuscript

Abstract

Within the scope of the characterization of a commercial pectate lyase (PAL) the pattern of substrate degradation by that enzyme was investigated with oligogalacturonic acids as well as pectins with various degrees of esterification as substrates. For this purpose an analytical size exclusion chromatographie method (HPSEC) was elaborated in order to evaluate the reaction products of the degraded substrates over the whole range of molecular weight with the main interest lying in the emerging oligogalacturonic acids. The degradation of polygalacturonic acid by PAL was additionally investigated by means of thin-layer chromatography (TLC) and viscosimetry. Furthermore spontaneous depolymerization and deesterification of the substrates occurring under the chosen conditions were examined. The PAL showed to be anendo-enzyme both by means of TLC and HPSEC. Polygalacturonic acid was broken down, mainly generating unsaturated tri- and digalacturonic acid; the corresponding monomer was not found. The mode of cleavage is discussed.

Zusammenfassung

Zur Charakterisierung einer kommerziellen Pektatlyase (PAL) wurde das Spaltungsmuster dieses Enzyms an Pektinen mit unterschiedlichen Veresterungsgraden sowie an Oligogalakturonsäuren untersucht. Dazu wurde eine Methode der analytischen Größenausschluß-Chromatographie (HPSEC) ausgearbeitet, um die Spaltprodukte der Substrate über den gesamten Molekulargewichtsbereich hinweg, vor allem aber entstehende Oligogalakturonsäuren, quantitativ zu bestimmen. An Polygalakturonsäure wurde der Abbau durch die PAL zusätzlich mittels Dünnschicht-Chromatographie (TLC) und Viskosimetrie untersucht. Ferner wurde die spontane Depolymerisation und Entesterung der Substrate unter den gewählten Bedingungen über- prüft. Sowohl mittels TLC als auch mittels HPSEC wurde derEndo-Enzym-Charakter der PAL deutlich. Polygalakturonsäure wurde hauptsächlich zu ungesättigter Tri- und Digalakturonsäure abgebaut; das entsprechende Monomer wurde nicht gefunden. Die Spaltungsweise wird diskutiert.

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Authors and Affiliations

  1. Institut für Lebensmitteltechnologie, Universität Hohenheim, Garbenstrasse 25, D-70599, Stuttgart, Germany

    Sybille Neidhart, Christa Hannak & Karlheinz Gierschner

  2. Wesergold Getränkeindustrie GmbH & CO. KG, Rinteln

    Achim Gessler

  3. Herbstreith & Fox KG, Neuenbürg

    Hans -Ulrich Endreß

Authors
  1. Sybille Neidhart
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  2. Achim Gessler
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  3. Christa Hannak
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  4. Hans -Ulrich Endreß
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  5. Karlheinz Gierschner
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Neidhart, S., Gessler, A., Hannak, C. et al. Anwendung der analytischen Größenausschluß-Chromatographie zur Untersuchung des Substratahbaus einer kommerziellen Pektatlyase ausErwinia carotovora . Z Lebensm Unters Forch 198, 317–324 (1994). https://doi.org/10.1007/BF01193182

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