Summary
The in vivo-activities of lactate-dehydrogenase and malate-dehydrogenase of clinically normal and psoriatic skin were determined by a modified method, earlier described.
The superficial cell layers of the living epidermis were exposed by scotch tape stripping. A glass-cup (“reaction compartment”, volume 1.4 ml) was fixed upon the skin and connected to a closed circulating system.
Solution of buffer containing coenzyme and substrate is continuously circulating over the skin-area under the glass-cup, on to a flow-cuvette in the photometer and back to the skin. An identical glass-cup, which is separated from the skin by a thin plastic-foil, is fixed near reaction-compartment and serves as “control-compartment”.
The decrease of extinction due to the substrate-dependent oxidation of NADH2 was measured stepwise: first with the reaction-compartment connected to the circuit, where the cellular activity together with the activity of liberated enzyme was determined. Thereafter, only the activity of the liberated enzyme was measured in the control-compartment. The difference between these two steps represents the cellular activity of the enzyme. The procedure can be repeated several times until the total NADH2 is oxidized, the reaction becomes reestablished by further addition of NADH2.
The cellular activity of lactate-dehydrogenase of psoriatic skin was increased by 47% in comparison to normal skin (the difference being statistically significant). The activity of malate-dehydrogenase was increased by 36%.
Exposition of the stripped skin to air between two subsequent measurements inhibited the reactions. After an ether wash 20–30% of the initial activities were recovered in healthy skin and 50–60% in psoriatic skin.
The results are in good agreement with reports on homogenates and show, that the increase of enzymatic activity in vitro is paralleled by an increased metabolic activity in vivo.
Zusammenfassung
Nach Modifikation einer von uns beschriebenen Methode zur Messung von Enzymaktivitäten an intakten Zellen wurde die Aktivität der Lactat- und Malat-Dehydrogenase von Normalpersonen und Psoriatikern in vivo untersucht.
Die biologisch aktiven Zellagen der obersten Epidermis wurden durch Tesafilmstripping freigelegt, und an dieser Stelle wurde eine an ein Umpumpsystem angeschlossene Glasglocke (Reaktionskammer) befestigt.
Das geschlossene Umpumpsystem ermöglichte einen kontinuierlichen Kreislauf von Pufferlösung, Coenzymen und Substraten von dem Hautareal zum Photometer und zurück. Eine gleiche Glasglocke, die jedoch mit Plastikfolie gegen die Haut verschlossen war, wurde neben der Reaktionsglocke aufgesetzt und diente als „Kontrollkammer“.
Die Messung des Extinktionsabfalles — bedingt durch den Verbrauch von NADH2 — erfolgte stufenweise in der Art, daß die Messung einmal mit eingeschalteter Reaktionsglocke bzw. Kontrollglocke erfolgte. Die Differenz der Ergebnisse beider Messungen stellt die zelluläre Enzymaktivität dar.
Die zelluläre Aktivität der LDH ist bei Psoriatikern um 47% gegenüber Gesunden gesteigert (und statistisch signifikant verschieden).
Bei der MDH wurde eine Steigerung der zellulären Aktivität der Psoriatiker von 36% gegenüber Hautgesunden gefunden.
Luftexposition der gestrippten Stelle verhindert eine erneute Messung. Nach Abreiben der Stelle mit Äther wurden bei Hautgesunden 20–30%, bei Psoriatikern 50–60% der Aktivität der ersten Messung gefunden.
Die Ergebnisse werden diskutiert und den im Homogenat gefundenen Resultaten gegenübergestellt.
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Nordhaus, R., Zesch, A. & Schaefer, H. Vergleichende enzymatische Messung an Hautgesunden und Psoriatikern in vivo. Arch. Derm. Forsch. 246, 1–10 (1973). https://doi.org/10.1007/BF00595482
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DOI: https://doi.org/10.1007/BF00595482