Identifikation des NY-ESO-1 Genproduktes als zytoplasmatisches tumor-assoziiertes Antigen

Zusammenfassung

Hintergrund: Bei Melanomen können Tumor-assoziierte Antigene (TAA) Ziele einer spezifischen zytotoxischen T-Zellantwort sein. Das NY-ESO-1-Gen kodiert ein neues TAA sogenanntes „tumorspezifisches Antigen“. Bislang wurde die Antigenexpression nur auf der Transkriptionsebene nachgewiesen, und es war nicht bekannt, ob das entsprechende Protein in Tumorzellen produziert wird. Wir haben deshalb NY-ESO-1-spezifische monoklonale Antikörper (mAk) hergestellt, die den Nachweis des NY-ESO-1-TAA auf Proteinebene ermöglichen.

Methodik: Zuerst wurde ein rekombinantes NY-ESO-1-Fusionsprotein hergestellt, welches zur Immunisierung von BALB/c-Mäusen verwendet wurde. In der Folge wurden NY-ESO-1-spezifische mAk generiert, welche sowohl das rekombinante wie auch das native Genprodukt erkennen. 12 frisch gefrorene Melanomproben wurden dann mittels Polymerasekettenreaktion (RT-PCR) und Immunhistochemie analysiert. Die NY-ESO-1-Genexpression wurde mit 25-30 RT-PCR-Zyklen unter Verwendung spezifischer Primerpaare für das ß-Actin- bzw. NY-ESO-1-Gen untersucht. Die immunhistochemische Untersuchung erfolgte mit dem selbst produzierten NY-ESO-1-spezifischen mAk.

Ergebnisse: Mit der RT-PCR konnten in 5 der 12 Melanomproben NY-ESO-1-Transkripte amplifiziert werden. Als positive Kontrolle diente das ß-Actin-Gen, welches in allen Proben nachweisbar war. Die immunhistochemische Anfärbung war in den 5 Melanomproben positiv, in denen auch das NY-ESO-1-Gen transkribiert wurde. In 2 Proben färbten sich mehr als 90% der Tumorzellen an, in 3 Proben hingegen weniger als 50%. Das NY-ESO-1-Protein fand sich ausschließlich in Tumorzellen (zytoplasmatische Lokalisation).

Schlußfolgerung: Das NY-ESO-1-Gen wird in Melanomen und anderen Malignomen (Oesophagus-, Mamma-, Lungen-, Blasen-, Prostatakarzinom u. a) transkribiert. Mit dem selbst hergestellten spezifischen mAk konnte das NY-ESO-1-Genprodukt in Melanomproben als zytoplasmatisches tumorassoziiertes Antigen identifiziert werden. Eine Untergruppe von Melanompatienten könnte grundsätzlich von einer gegen das NY-ESO-1-TAA gerichtete aktive, spezifische Immuntherapie profitieren.