Zusammenfassung
Hintergrund
Ziel war, mit einem unverstärkten Femtosekundenlaser Multiphotoneneffekte zu induzieren und für Hornhautbildgebung und Gewebeabtrag zu nutzen.
Material und Methoden
Unverstärkte Titan-Saphir-Laser wurden zur Untersuchung von menschlichen Hornhäuten und Schweinehornhäuten an Laserscanningmikroskope gekoppelt. Bildgebung sowie Erzeugung von Gewebeläsionen erfolgten im gleichen Strahlengang mit Pulsenergien < 2 nJ.
Ergebnisse
Zelluläre Bestandteile und extrazelluläre Matrix wurden selektiv mittels Autofluoreszenz und Frequenzverdopplung in Submikrometerauflösung dargestellt. Nach intrastromaler linearer Laserabtastung mit höheren Leistungen entstand ein lumineszentes Plasma. Die Läsionsbreite nahm mit zunehmender Gewebetiefe ab und mit zunehmender Laserleistung am Objektiv zu. In der Lichtmikroskopie zeigte sich nach dem Laserabtrag in der Umgebung der Läsion intaktes Stroma.
Schlussfolgerung
Mit niederenergetischen Femtosekundenlaserpulsen wurden hochauflösende Bilder sowie präzise Gewebeläsionen in der Kornea erzeugt. Der einfache Wechsel zwischen Bildgebung und Gewebeabtrag lässt diagnostische und therapeutische Anwendungen möglich erscheinen.
Abstract
Background
Non-amplified femtosecond laser was used to induce multiphoton effects for corneal tissue imaging and for tissue ablation.
Material and methods
A non-amplified titanium-sapphire laser was coupled to a laser scanning microscope in order to examine human and porcine cornea. Tissue was subjected to imaging and lesions were created using identical optical pathways at pulse energies below 2 nJ.
Results
Cellular components and the extracellular matrix were selectively imaged by applying autofluorescence and second harmonic generation at submicron resolution. Intrastromal linear scanning at higher power resulted in luminescent plasma along the scanning line. Lesion width decreased with increasing tissue depth and increased with increasing laser power at the target. Light microscopy showed intact stromal tissue around the area of the lesion.
Conclusions
High-resolution images as well as high precision tissue lesions were created in the cornea using low energy femtosecond laser pulses. Easy switching between tissue imaging and ablation seems to be suitable for diagnostic and therapeutic applications.
Literatur
Aptel F, Olivier N, Deniset-Besseau A et al (2010) Multimodal nonlinear imaging of the human cornea. Invest Ophthalmol Vis Sci 51:2459–2465
Gauderon R, Lukins P, Sheppard C (2001) Simultaneous multichannel nonlinear imaging: combined two-photon excited fluorescence and second-harmonic generation microscopy. Micron 32:685–689
Göppert-Mayer M (1931) Über Elementarakte mit zwei Quantensprüngen. Ann Phys 9:273–295
Hild M, Krause M, Riemann I et al (2008) Femtosecond laser-assisted retinal imaging and ablation: experimental pilot study. Curr Eye Res 33:351–363
Kim P, Sutton G, Rootman S (2011) Applications of the femtosecond laser in corneal refractive surgery. Curr Opin Ophthalmol 22:238–244
König K (2003) High-resolution multiphoton imaging and nanosurgery of the cornea using femtosecond laser pulses. In: Fankhauser F, Kwasniewska S (Hrsg) Lasers in phthalmology-basic, diagnostic and surgical aspects. Kugler Publications, The Hague, S 79–89
König K, Krauss O, Riemann I (2002) Intratissue surgery with 80 MHz nanojoule femtosecond laser pulses in the near infrared. Opt Express 10:171–176
König K, Wollina U, Riemann I et al (2002) Tomography of human skin with subcellular spatial and picosecond time resolution using intense near infrared femtosecond laser pulses. SPIE-Proceedings 4620, 97–109
Krüger A, Hovakymian M, Ramirez D et al (2011) Combined nonlinear and femtosecond confocal laser-scanning microscopy of rabbit corneas after photochemical cross-linking. Invest Ophthalmol Vis Sci 52:4247–4255
Krüger A, Hovakymian M, Ramirez D et al (2009) Farbstofffreie Zweiphotonenmikroskopie der Augenhornhaut. Klin Monatsbl Augenheilkd 226:970–979
Masters B (2009) Correlation of histology and linear and nonlinear microscopy of the living human cornea. J Biophotonics 3:127–139
Morishige N, Petroll W, Nishida T et al (2006) Noninvasive corneal stromal collagen imaging using two-photon-generated second-harmonic signals. J Cataract Refract Surg 32:1784–1791
Morishige N, Wahlert A, Kenney M et al (2007) Second-harmonic imaging microscopy of normal human and keratoconus cornea. Invest Ophthalmol Vis Sci 48:1087–1094
Steven P, Hovakymian M, Guthoff R et al (2010) Imaging corneal crosslinking by autofluorescence 2-photon microscopy, second harmonic generation, and fluorescence lifetime measurements. J Cataract Refract Surg 36:2150–2159
Tan H, Sun Y, Lo W et al (2006) Multiphoton fluorescence and second harmonic generation imaging of the structural alterations in keratoconus ex vivo. Invest Ophthalmol Vis Sci 47:5251–5259
Teng S, Tan H, Peng J et al (2006) Multiphoton autofluorescence and second-harmonic generation imaging of the ex vivo porcine eye. Invest Ophthalmol Vis Sci 47:1216–1224
Wang B, Eitner A, Lindenau J et al (2008) High-resolution two-photon excitation microscopy of ocular tissues in porcine eye. Lasers Surg Med 40:247–256
Zipfel W, Williams R, Christie R et al (2003) Live tissue intrinsic emission microscopy using multiphoton-excited native fluorescence and second harmonic generation. Proc Natl Acad Sci U S A 100:7075–7080
Zoumi A, Yeh A, Tromberg B (2002) Imaging cells and extracellular matrix in vivo by using second-harmonic generation and two-photon excited fluorescence. Appl Biol Sci 99:11014–11019
Interessenkonflikt
Der korrespondierende Autor gibt für sich und seine Koautoren an, dass kein Interessenkonflikt besteht.
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Dieses Manuskript basiert auf einer Präsentation, gezeigt auf dem Kongress der Deutschen Ophthalmologischen Gesellschaft 2006.
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Huss, C., Krause, M., Löw, U. et al. Experimentelle Hornhautbildgebung und Hornhautchirurgie mit nicht verstärkten Femtosekundenlaserpulsen. Ophthalmologe 109, 995–1000 (2012). https://doi.org/10.1007/s00347-012-2602-3
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DOI: https://doi.org/10.1007/s00347-012-2602-3