Diagnostik von Dermatomykosen mit der Polymerase-Kettenreaktion

Zusammenfassung

Ein Nachweissystem für Dermatophyten mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR) wurde entwickelt. Die Primer „TR1” und „TR2” flankieren eine 581 bp lange Sequenz innerhalb des Gens, das für die kleine ribosomale Untereinheit (18S rRNA) von Pilzen kodiert. Mittels PCR ließ sich die DNA von Isolaten der 7 häufigsten Dermatophyten amplifizieren, daneben die von einigen Hefe- und Schimmelpilzen. Durch Hybridisierung mit spezifischen Detektionsoligonukleotiden gelang die Identifizierung von Dermatophyten und Candida albicans. Die Restriktionsfragmentanalyse erlaubte die Abgrenzung der Dermatophyten gegenüber den Hefe- und Schimmelpilzen. Die Spezifität der PCR für Pilze wurde an menschlicher DNA aus 42 Dermis- und Epidermisproben sowie an ausgesuchter tierischer und pflanzlicher DNA überprüft. Um die klinische Relevanz des Verfahrens zu evaluieren, wurden 69 routinemäßig gewonnene Haut- und Nagelproben mit der PCR und der Kultur untersucht. Mit der PCR wurden in 35 und mit der Kultur in 28 der insgesamt 38 positiv bewerteten Patientenproben Dermatophyten nachgewiesen. Die Sensitivität der PCR (92%) war höher als die der Kultur (73%). Das Ergebnis dieser Untersuchung zeigt, daß die PCR Vorteile gegenüber der Kultur beim Nachweis von Dermatophyten hat.

Summary

A polymerase chain reaction (PCR) assay for the detection of dermatophytes was established. The primers ”TR1” and ”TR2” amplify a 581 bp fragment within the gene coding for the small ribosomal subunit (18S rRNA) of fungi. PCR allowed the detection of isolates of 7 common dermatophytes and in addition several yeasts and moulds. Hybridisation with specific oligonucleotides results in the identification of dermatophytes and Candida albicans. Restriction analysis of the PCR product allowed us to distinguish between dermatophytes and yeasts or moulds. The specifity of the PCR with respect to fungi was assessed by testing human DNA collected from 42 dermis and epidermis specimens as well as DNA from selected plants and animals. To evaluate the clinical relevance of the PCR assay, 69 routinely collected skin and nail specimens were examined by PCR and culture. PCR detected dermatophytes in 35 and culture in 28 of 38 specimens that were classified as positive. Sensitivity of PCR (92%) was higher than that of culture (73%). These results show that PCR has advantages over culture for the detection of dermatophytes.