Lebende Langzeitkonservierung von humaner Gingiva in der Perfusionskultur

Zusammenfassung

Die Perfusionskultur bietet den Vorteil, daß Gingivaexplantate unter einfachen experimentellen Voraussetzungen über einen Zeitraum von 3 Wochen in lebender Form konserviert werden können. Somit rückt die Verwendung lebend konservierter Gingivaexplantate für autogene Transplantationen in greifbare Nähe. gingiva wurde gesunden Patienten bei Molarenextraktionen entnommen und ohne Subkultur oder enzymatische Disaggregation in einen Gewebeträger eingelegt und in Perfusionskultur genommen. Zum Zeitpunkt der Entnahme und nach 7, 14 und 21 Tagen Perfusionskultur mit serumfreiem Keratinocyte-Growth-Medium wurden die Epithelien morphologisch auf ihre Integrität und immunhistochemisch mit Zytokeratin- und Vimentinantikörpern auf ihre gewebetypische Proteinexpression untersucht. Eine Schichtung des kultivierten Epithelverbands vom Stratum basale bis zum Stratum corneum war über 21 Tage hinweg zu erkennen. Die immunhistochemischen Resultate zeigten eine gewebespezifische Zytokeratinexpression mit Antikörpern gegen die Zytokeratine CK 5/6, CK 14 und CK 19 über den gesamten Kulturzeitraum von 3 Wochen. Vimentin war nach 7-tägiger Kultur in der Fibroblastenschicht und in geringem Maß vereinzelt in allen Epithelschichten zu erkennen. Die Verwendung von konservierten Gingivaexplantaten aus der Perfusionskultur als autogenes Transplantat soll nun auf seine medizinische Anwendbarkeit überprüft werden.

Summary

Perfusion culture offers the advantage of keeping gingiva alive for a long time as an stable explant according to cell biological parameters. To investigate the suitability of cultured human gingival explants for transplantations the biopsies were put into a newly developed perfusion chamber and cultured for at least 21 days. Gingiva explants were derived from healthy donors undergoing surgical removal of molar teeth. The tissue pieces were cultured without prior proteolytic desintegration or subculture. Immediately after excision a morphological and immunohistochemical analysis of the tissue was carried out and the distribution pattern of cytokeratin and vimentin was examined. Gingival explants cultured for 7, 14 and 21 days in serumfree keratinocyte growth medium in perfusion culture were analyzed in the same way. The morphology of the cultured explant (21 days) was well preserved from stratum basale up to stratum corneum. As proved by immunohistochemical incubation with antibodies to CK 5/6, CK 14 and CK 19, a tissue-specific cytokeratin (CK) expression pattern was maintained during the whole perfusion period. After 7 days of culture vimentin was synthesized in the fibroblast layer and was found in small quantities in each layer of the epithelium. In contrast to conventional cultures, where dissociation of the tissue and a subculture interruption is usually needed for long-term culture, this is not necessary for perfusion cultured tissue. The use of perfusion-cultured gingival explants as autogenous transplants is investigated herein.