Detection of potato viruses A, M, S, X, Yand leafroll and potato spindle tuber viroid from tissue culture plantlets using single leaf discs

Abstract

Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and dotimmunobinding assay (DIBA) for potato viruses A (PVA), M (PVM), S (PVS), X (PVX), Y^N (PVY^N), Y^O (PVY^O) and leafroll (PLRV) and nucleic acid spot hybridization (NASH) for potato spindle tuber viroid (PSTVd), virus and viroid were detected reliably from single leaf discs (6 mm) of tissue-culture plantlets. Leaf discs taken from leaf positions (1 to 8) (bottom to top) can be used for detection of all viruses except PLRV where the lower leaves had higher concentrations of virus than the leaves from the upper part of the plantlet. Virus cultures were maintained for 1 to 4 years in several potato cultivars. The levels of virus remained reproducible except for PVM concentration, which was found to be very low in cv. Green Mountain. Using densitometry software, the DIBA spots were quantified and results were comparable to A₄₀₅ values obtained by ELISA. PSTVd concentration as measured by densitometry from spots of NASH indicated no loss of viroid over 1–4 years in tissue culture in two potato cultivars.

Compendio

Tanto los virus de la papa A (PVA), M (PVM), S (PVS), X (PVX), Y^N (PVY^N), Y^O (PVY^O) y el virus del enrollamiento de la hoja (PLRV) como el viroide del tubérculo ahusado de la papa (PSTVd) pudieron ser detectados con precisión a partir de discos foliares individuales de 6 mm obtenidos de plántulas desarrolladas en cultivo de tejidos. Para detectar los virus se usaron las técnicas de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) y DIBA (dot-immunobinding assay), y para PSTVd se usó la prueba de hibridación local de ácidos nucleicos (NASH). Los discos individuales obtenidos de las posiciones foliares 1 a 8 (de abajo hacia arriba) pueden ser usados para detectar todos los virus con la excepcion de PLRV, con el cual las hojas inferiores de la plantula mostraron mayores concentraciones de virus que las superiores. Los cultivos de virus fueron mantenidos de uno a cuatro anos en varios cultivares de papa. Los niveles de virus permanecieron estables excepto para PVM, cuya concentración fue muy baja en el cv. Green Mountain. Los puntos de la prueba de DIBA fueron cuantificados por medio de un software de densitometría y los resultados fueron similares a los valores de ELISA obtenidos a A₄₀₅. La concentración de PSTVd, determinada por el análisis densitométrico de las manchas de NASH, no indicaron pérdidas del viroide mantenido de uno a cuatro años en cultivo de tejidos de dos cultivares de papa.