An improved latex agglutination test for routine detection of potato viruses

Summary

A modified latex agglutination test with plastic Petri dishes and the dispersant Tween-20 in the extraction buffer proved to be a simple, reliable procedure for routine detection of potato viruses X, Y, S, Andean potato laten and Andean potato mottle in leaves both of singly infected indicator hosts and potato. The main advantages of the modified method are that the flocculates found are large and easy to see, that equal or less amounts of sensitized latex are used, and that non-specific reactions occur less often than with other methods. The method is equally sensitive for detecting more than one virus when polyvalent latex is used.

Zusammenfassung

Eine modifizierte Version des Latex-Agglutinationstests mit Plastikpetrischalen als Reaktionsgefässe und 0,05% des Dispersionsmittels Tween-20 im Extraktionspuffer erwies sich sowohl bei Blättern als auch Indikatorpflanzen und Kartoffeln als einfache und zuverlässige Prozedur zum routinemässigen Nachweis der Kartoffelviren X, Y, S, APLV und APMV (Tabelle 2). Gegenüber Mikropipettierung ergab Latex bei der Ermittlung der isometrischen Viren APLV und APMV eine 500- bis 1000-fach höhere, bei den stäbchenförmigen Viren PVX, PVS und PVY jedoch nur eine 16- bis 125-fach höhere Empfindlichkeit (Tabelle 3, Abbildung IB). Die Empfindlichkeiten von uni- und polyvalentem Latex zur Ermittlung sowohl isometrischer (APLV, APMV) wie stäbchenförmiger Viren (PVX, PVS, PVY) oder beider Typen waren gleich hoch. Simultan für beide Virustypen war polyvalentes Latex zur gleichzeitigen Ermittlung von vier Viren gleichermassen empfindlich (Tabelle 4). Alle fünf Viren liessen sich von einzelnen Kartoffelblättern sowie von Mischungen von einem infizierten mit bis zu 80 gesunden Blättern sicher nachweisen. APLV, PVS und PVX waren auch in Trieben und Knollengewebe sicher nachzuweisen, nicht jedoch PVY und APMV, wegen niedriger Lagertemperatur der Knollen vor der Testung (Tabelle 5). Hauptvorteil im Vergleich zu anderen Arten des Latextests sind grössere und besser sichtbare Ausflockungen (Abbildung 1A); bei Verwendung von gleichem oder weniger sensitiviertem Latex werden nicht-spezifische Reaktionen grösstenteils verhindert, ein Nachweis von Viren wird über eine grosse Konzentrationsbreite möglich. Ein Nachteil ist die Hemmung der Reaktion durch Antigen-Überschuss bei denjenigen Viren, die in infiziertem Gewebe eine sehr hohe Konzentration erreichen.

Résumé

Une version modifiée du test d'agglutination à l'aide de latex en boites de Petri de plastique, utilisant pour l'extraction une solution tampon contenant 0,05% de Tween 20, s'est a vérée être une technique simple et sûre pour la détection de routine des virus X, Y, S, ainsi que des virus ‘latent’ et de la ‘marbrure’ des Andes de la pomme de terre (APLV et APMV), à partir de feuilles de plantes indicatrices et de pommes de terre (tableau 2); le latex rend ce test de 500 à 1000 fois plus sensible que la microprécipitation lors de la détection des virus de forme isométrique, APLV et APMV, mais seulement de 16 à 125 fois plus sensible pour les virus allongés tels que X, S et M (tableau 3, figure 1 B). La sensibilité des latex univalents et polyvalents est la même pour la détection des virus de forme isométrique ou allongée et pour les deux types de virus simultanément; le latex polyvalent s'est montré d'une bonne sensibilité pour la détection de 4 virus à la fois (tableau 4). Les cinq virus étudiés peuvent être détectés avec sûreté à partir d'une seule feuille de pomme de terre ou d'un mélange d'une feuille infectée et jusqu'à 80 feuilles saines. APLV et les virus X et S ont été décelés facilement dans les germes et la chair des tubercules; par contre, APMV et le virus Y n'ont pas été détectés en raison des basses températures auxquelles ont été conservés les tubercules avant le test (tableau 5). Les principaux avantages de cette méthode comparée aux autres utilisant le latex sont qu'elle donne des floculats plus gros, donc, plus visibles (figure 1 A), nécessite une quantité de latex égale ou moindre, préserve des réactions non spécifiques et permet la détection des virus sur une grande gamme de concentrations. L'inconvénient est une inhibition de la réaction par excès d'antigènes avec les virus dont la concentration est très élevée dans les tissus infectés.