Assay of insulin-like activity by the isolated fat cell method

Summary

Native sera from normal persons were assayed for insulin-like activity (ILA) at a dilution of 5 per cent in Krebs-Ringer bicarbonate buffer. The activity was partially suppressed by the addition of insulin antibodies. — Sera obtained from 4 fasting normal humans had a suppressible ILA of 12–21μU per ml (measured ILA times dilution factor). 30–60 minutes after a glucose load by mouth the suppressible ILA increased to 32–97μU per ml. A non-suppressible ILA equivalent to about 50–80μU per ml was found in all of the sera and this fraction did not change during the glucose tolerance test. Insulin added to the sera was recovered quantitatively. The suppressible ILA was arithmetically diluted in 10, 5, 2.5 and 1.25 per cent serum. The reaction of crystalline human insulin and that of suppressible ILA to beef insulin antibodies were similar. The suppressible ILA of each of 16 sera from the 4 normal persons was not different from the immunoreactive insulin as assayed by the method ofHales andRandle.

Résumé

L'activité insulinique (ILA) des sérums de sujets normaux a été dosée en utilisant une dilution à 5 pour cent dans du tampon au bicarbonate de KrebsRinger. L'activité était partiellement supprimée par l'addition d'anticorps anti-insuline. — Les sérums provenant de 4 sujets normaux à jeun présentaient une ILA supprimable de 12–21μU par ml (ILA mesurée multipliée par le facteur de dilution). 30–60 minutes après une charge en glucose per os l'ILA supprimable s'élevait à 32–97μU par ml. On a trouvé une ILA non-supprimable équivalente à environ 50–80μU par ml dans tous les sérums, et cette fraction ne changeait pas pendant le test de tolérance au glucose. L'insuline ajoutée aux sérums était retrouvée quantitativement. Quand les sérums étaient dilués à 10, 5, 2.5 et 1.25 pour cent, l'ILA supprimable était diluée dans les mêmes proportions. L'insuline humaine cristalline et l'ILA supprimable réagissaient de la même façon vis-à-vis des anticorps anti-insuline de boeuf. L'ILA supprimable de chacun des 16 sérums des 4 sujets normaux n'était pas différente de l'insuline immunoréactive, dosée d'après la méthode deHales etRandle.

Zusammenfassung

Die insulinähnliche Aktivität (ILA) wurde im Nativserum von Normalpersonen nach Verdünnung mit Krebs-Ringer-Bikarbonatpuffer im Verhältnis 1:20 bestimmt. Die Aktivität war durch Zugabe von Insulinantikörper teilweise zu hemmen. — Seren von 4 fastenden Normalpersonen enthielten 12–21μ Einheiten pro ml hemmbarer ILA (gemessene ILA mal Verdünnungsfaktor). 30–60 Minuten nach einer oralen Glucosebelastung stieg die hemmbare ILA auf 32–97μ Einheiten pro ml an. Die nicht hemmbare ILA entsprach in allen Seren einer Aktivität von etwa 50–80μ Einheiten pro ml. Diese Fraktion blieb während des Glucosetoleranztestes unverändert. Insulin, das Serum zugegeben wurde, konnte quantitativ wiedergefunden werden. Die hemmbare ILA blieb bei Serumkonzentrationen von 10, 5, 2.5 und 1.25% der Verdünnung proportional. Kristallines Humaninsulin und hemmbare ILA reagierten in ähnlicher Weise mit Antikörpern gegen Rinderinsulin. Die hemmbare ILA eines jeden der von 4 Normalpersonen erhaltenen 16 Seren unterschied sich nicht von dem nachHales undRandle bestimmten immunoreaktiven Insulin.