Abstract
Protein A-gold complexes with gold particle diameters of 7 and 16 nm were prepared and could be stored at 4°C for at least 5 months without loosing activity. The complexes were used to detect antibodies bound to two plant viruses in mixed suspensions. Depending on the antibodies used, each virus could be labelled specifically with protein A-gold complexes with a gold particle diameter of either 7 nm or 16 nm.
A double-labelling technique was developed by which the viruses in suspension could be labelled specifically with protein A-gold complexes with gold particle diameters of either of the two sizes mentioned. Using this technique it was possible to distinguish and identify two viruses with a similar spherical appearance in the electron microscope in mixed preparations.
Samenvatting
Proteïne A werd geadsorbeerd aan colloïdale gouddeeltjes met een diameter van 7 en 16 nm. Deze proteïne A-goudcomplexen werden gebruikt voor de specifieke merking van antilichamen gebonden aan virusdeeltjes in mengsuspensies van twee virussen.
Afhankelijk van het antiserum dat werd gebruikt was het mogelijk om, in suspensies van tabaksmozaïekvirus (TMV) en ‘cowpea chlorotic mottle’ virus (CCMV) of van CCMV en ‘southern bean mosaic’ virus (SBMV), elk virus afzonderlijk te merken met gouddeeltjes van 7 en 16 nm.
Een techniek voor dubbele merking werd ontwikkeld waarbij de virussen in mengsuspensies specifiek gemerkt konden worden met proteïne A-goudcomplexen die gouddeeltjes bevatten van de twee genoemde afmetingen. Zo kon in een gemengde virussuspensie van CCMV en TMV, TMV specifiek gemerkt worden met gouddeeltjes van 16 nm en CCMV met deeltjes van 7 nm. In mengsuspensies van CCMV en SBMV werd CCMV specifiek gemerkt met gouddeeltjes van 7 nm en SBMV met deeltjes van 16 nm. Met deze dubbele merking is het mogelijk met een elektronenmicroscoop onderscheid te maken tussen twee gelijkvormige virussen die in één preparaat voorkomen. Tevens is met deze techniek een positieve identificatie van beide virussen mogelijk.
Similar content being viewed by others
References
Derrick, K.S., 1973. Quantitative assay for plant viruses using serologically specific electron microscopy. Virology56: 652–653.
Geuze, H.J., Slot, J.W., Scheffer, R.C.T. & Ley, P.A. van der, 1981. Use of colloidal gold particles in double-labelling immunoelectron microscopy of ultrathin frozen tissue sections. J. Cell Biol. 89: 653–665.
Horrisberger, M. & Rosset, J., 1977. Colloidal gold, a useful marker for transmission and scanning electronmicroscopy. J. Histochem. Cytochem. 25: 295–305.
Lin, N.S., 1984. Gold-IgG complexes improve the detection and identification of viruses in leaf dip preparations. J. virol. Meth. 8: 181–190.
Louro, D. & Lesemann, D.-E., 1984. Use of protein A-gold complex for specific labelling of antibodies bound to plant viruses. I. Viral antigens in suspensions. J. virol. Meth. 9: 107–122.
Milne, R.G. & Luisoni, E., 1975. Rapid high-resolution immune electron microscopy of plant viruses. Virology 68: 270–274.
Mühlpfordt, M., 1982. The preparation of colloidal gold particles using tannic acid as an additional reducing agent. Experientia 38: 1127–1128.
Noordam, D., 1973. Indentification of plant viruses. Methods and experiments. Centre for Agricultural Publishing and Documentation (Pudoc), Wageningen, the Netherlands.
Pares, R.D. & Whitecross, W.I., 1982. Gold-labelled antibody decoration (GLAD) in the diagnosis of plant viruses by immuno-electron microscopy. J. Immunol. Meth. 51: 23–28.
Slot, J.W. & Geuze, H.J., 1981. Sizing of protein A-colloidal gold probes for immunoelectron microscopy. J. Cell Biol. 90: 533–536.
Verduin, B.J.M., 1978. Degradation of cowpea chlorotic mottle virus ribonucleic acid in situ. J. gen. Virol. 39: 131–147.
Author information
Authors and Affiliations
Rights and permissions
About this article
Cite this article
Van Lent, J.W.M., Verduin, B.J.M. Specific gold-labelling of antibodies bound to plant viruses in mixed suspensions. Netherlands Journal of Plant Pathology 91, 205–213 (1985). https://doi.org/10.1007/BF01997964
Accepted:
Issue Date:
DOI: https://doi.org/10.1007/BF01997964