Über die radioimmunologische Bestimmung von Insulin im Blut

Zusammenfassung

Es wurden Verfahren zur Trennung des freien und antikörpergebundenen Jod¹³¹-Insulins für die radioimmunologische Insulinbestimmung mit Agargelelektrophorese und Anionenaustauschern (Dowex 1 und Amberlite) beschrieben.

Verwendet wurde Jod¹³¹-Insulin vom Schwein, Rind und Menschen, das zum Teil nachGreenwood undHunter mit Chloramin T und NaJ¹³¹ selbst markiert wurde. Durch die Jod¹³¹-Markierung entstehen Verunreinigungen, die sich an α₂-Globulin binden und durch einen besonderen Reinigungsprozeß mit Hilfe einer Sephadex-Säule abgetrennt werden müssen. Der Einfluß dieser Verunreinigungen sowohl auf das Meßergebnis als auch auf die Genauigkeit des radioimmunologischen Insulinbestimmungsverfahrens wird an typischen Beispielen demonstriert.

Mit gereinigtem Jod¹³¹-Insulin und der Verwendung von Anionenaustauschern ergibt sich eine hohe Genauigkeit mit einem Index von 0,039. Im Nüchternserum von 30 Stoffwechselgesunden wurde ein mittlerer immunologisch reagierender Insulingehalt von 22 ± 10 µE/ml gemessen. Nach einer oralen Glucosebelastung (100 g p. o.) fand sich bei 8 Stoffwechselgesunden nach 60 min ein maximaler Anstieg bis auf 128 µE/ml.

Summary

Various methods for separating the free and the antibodybound (J ¹³¹-)hormone in order to perform a sensitive and precise radio-immunochemical assay of serum insulin concentration have been investigated. Human, porcine and bovine insulin were studied. The insulin was labelled in part in the own laboratory by means of Chloramin-T and NaJ¹³¹ and in part commercially availableJ ¹³¹-insulin preparations were used. Considerable degradation of the insulin following the labelling procedure withJ ¹³¹ has been observed, leading to non-specific binding of the degradation products to α₂-serum globulins, which interfered with the assay. The removal of those degradation products by Sephadex G 75 filtration has been shown in detail.

Separation of the free and the antibody-bound (J ¹³¹-)insulin has been achieved by means of agar electrophoresis and of anion-exchange resins (Dowex 1 and Amberlite CG-400 I). The latter technique yielded a sensitivity of 0.5–1µU insulin with a precision index ofλ 0.039. A mean fasting concentration of 22 ± 10µU Insulin per ml. has been determined in the serum of 30 normal subjects which in 8 cases rose to a maximum of 128µU insulin per ml. serum, 1 hour after 100 g glucose orally.