Propagation of human hepatitis A virus in a hepatoma cell line

Summary

Hepatitis A virus (HAV) was isolated directly from human feces and propagated serially in an HBsAg producing human hepatoma cell line. No cytopathic effect was observed in the tissue culture and no detectable amounts of HAV were present in the tissue culture supernatant fluid. However, increasing amounts of hepatitis A antigen (HAAg) were detected by radioimmunoassay in the cell extracts obtained by freezing and thawing of cells. Specificity of the HAAg determination was shown by neutralization with convalescent sera of marmosets experimentally infected with the MS-1 strain of hepatitis A and by the absence of this neutralization with preinoculation sera. HAAg was first detected after four weeks in the cell extract of infected cultures after inoculation of 10²–10⁴ tissue culture infectious doses of HAV from second passage.

Zusammenfassung

Hepatitis A Virus (HAV) konnte in einer HBsAg produzierenden menschlichen Hepatomazellinie direkt aus dem menschlichen Stuhl isoliert und passagiert werden. Dabei wurde weder ein zytopathischer Effekt noch das Auftreten von HAV im Gewebekulturüberstand beobachtet. Zunehmende Mengen von Hepatitis A Antigen (HAAg) waren jedoch in Zellextrakten, die durch Frieren und Tauen aus den Zellen gewonnen worden waren, mit einem Radioimmunassay nachzuweisen. Die Spezifität dieses Nachweises wurde durch Neutralisation des HAAg mit Rekonvaleszentenseren von experimentell mit dem MS-1 Stamm des HAV infizierten Krallenaffen gezeigt und durch das Fehlen dieser Neutralisation mit Seren, die vor der Inokulation gewonnen worden waren. HAAg konnte nach der Inokulation von 10²–10⁴ für die Gewebekultur infektiösen Dosen des HAV der zweiten Gewebekulturpassage erstmals nach vier Wochen im Zellextrakt der infizierten Kulturen gefunden werden.