Identification of young megakaryocytes by immunofluorescence and cytophotometry

Zusammenfassung

Es wurde der DNA-Gehalt von fluoreszeinmarkierten, Thrombozytenantigen enthaltenden Zellen im Knochenmark der Maus untersucht. Die Immunfluoreszenz wurde mit hochspezifischem Anti-Mäuse-Thrombozyten-Serum nach der „sandwich“-Methode mit fluoreszeinkonjugiertem Antigammaglobulin durchgeführt. Als Vergleich dienten 300 nach panoptischen Kriterien differenzierbare Megakaryozyten. Das DNA-Verteilungsmuster der Megakaryozyten und der immunfluoreszenzpositiven Zellen war weitgehend identisch. Allerdings wiesen die immunofluoreszenzpositiven Zellen DNA-Werte auch unterhalb 4c auf, während die im Pappenheim-Präparat differenzierbaren Megakaryozyten keine DNA-Werte in diesem Bereich erkennen ließen. Der Anteil diploder bzw. tetraploider immunfluoreszenzpositiver Zellen betrug 6 bzw. 7% im Vergleich zu 0 bzw. 1% bei den panoptisch differenzierbaren Megakaryozyten. Die Ergebnisse lassen den Schluß zu, daß mit Hilfe der Immunfluoreszenz megakaryozytäre Zellen mit diploidem bzw. tetraploidem DNA-Gehalt nachgewiesen werden können. Dies deutet darauf hin, daß der Einstrom der Zellen aus dem undeterminierten Vorläuferzellkompartment in das determinierte Kompartment bereits auf dieser frühen Stufe der Megakaryozytenproduktion stattfindet.

Summary

The DNA-content of fluoresceine-labeled platelet antigen containing cells of mouse bone marrow was measured. For immunofluorescence highly specific anti-mouse-platelet-serum and fluoresceine-conjugated antigammaglobuline was used, applying the “sandwich” technique. Three hundred panoptically identifiable megakaryocytes served as control group. The DNA-polyploidization pattern of megakaryocytes and immunofluorescence positive cells was almost identical. However, among the immunofluorescence positive cells a considerable amount of cells showed DNA-values lower than 4c, whereas the megakaryocytes of the Pappenheim stained smears revealed no DNA values lower than 4c. The percentages of diploid and tetraploid cells, respectively, was 6 and 7% compared with 0 and 1% of panoptically identifiable megakaryocytes. The results suggest that young megakaryocytic cells with diploid and tetraploid DNA-values can be detected by immunofluorescence technique, indicating that the flow from the uncommited to the committed megakaryocytic precursor cell appears at this early stage of megakaryocyte production.