Zur Methodik der Purinbestimmung in kleinen Mengen tierischer Gewebe

Zusammenfassung

• 1. Die Methode der Gesamtpurinbestimmung in kleinen Mengen tierischer Gewebe nachG. Schmidt wird einer Prüfung unterzogen. Die vonS. Edlbacher undP. Jucker eingeführten Modifikationen können nach eigenen unabhängig davon gemachten Erfahrungen voll und ganz bestätigt werden. Bei alkoholfixiertem Gewebe muß jedoch die Hydrolysendauer um das Doppelte verlängert werden, um brauchbare Werte zu erhalten. Bei sehr purinreichen Organen empfiehlt es sich, mit den zur Verarbeitung gelangenden Filtratmengen auf die 0,1 bis 0,2 g Gewebe entsprechenden Mengen herunterzugehen.

• 2. Die vonSt. E. Kerr undM. E. Blish für Blut und Muskulatur ausgearbeitete Methodik zur Bestimmung freier Nucleotide und Nucleoside ergibt bei anderen Geweben vielfach zu hohe Werte. Die Ursache dafür liegt in einer Adsorption anderer N-haltiger Bestandteile an die diversen Niederschläge. Im speziellen konnte der Einfluß von Phosphatzusatz bei der Uranfällung der Nucleotide und die Bedeutung einer zu hohen Kupferkonzentration bei der Fällung der Purine mittels Kupferhydroxyd nachgewiesen werden. Auf Grund dieser Erfahrung wird eine Modifikation derKerr- undBlishschen Methode vorgeschlagen, welche diese Fehler nach Tunlichkeit vermeidet.

• 3. Es wird eine Methodik angegeben, die es ermöglicht, Nucleinsäurepurin, freies Nucleotid, Nucleosid und Purin nebeneinander in der gleichen Gewebsportion zu bestimmen.

Summary

• 1. G. Schmidt's method of total purine determination in small quantities of animal tissues is subjected to a critical examination. The value of the modifications suggested byS. Edlbacher andP. Jucker can be confirmed to a full extent by experiences which the author gathered, independently of these investigators. When, however, tissues fixed by means of alcohol are taken for analysis the hydrolysis has to be extended for twice the time than usual in order to get reliable results. When organs very rich in purines have to be analysed it is recommended to reduce the quantities of filtrate used for analysis to volumes corresponding to 0,1–0,2 g. of tissue.

• 2. The technique developed bySt. E. Kerr andM. E. Blish for the determination of free nucleotides and nucleosides in blood and musculature often gives too high results with other tissues. This is due to the fact that other constituents containing nitrogen are adsorbed by the various precipitates. The author was able to prove, in particular, that phosphate added has an influence on the precipitation of nucleotides by uranium salts and that too high a concentration of copper salts is of importance for the precipitation of purines by means of copper hydroxide. According to this experience a modification of theKerr andBlish method is suggested by which the errors mentioned are avoided as far as possible.

• 3. A technique is given by means of which 1. purine derived from nucleinic acid, 2. free nucleotide, 3. nucleoside, and 4. purine can be determined in the presence of each other and in the same portion of tissue.

Résumé

• 1° La méthode du dosage complet des purines dans de petites quantités de tissus d'animaux selonG. Schmidt fut examiné. L'auteur put prouver par ses propres expériences l'aptitude des modifications de cette méthode, proposées parS. Edlbacher etP. Jucker. Mais si le tissu est fixé à l'alcool, il faut prolonger la durée de l'hydrolyse, pour avoir des résultats utilisables. Si les organes sont très riches en purines, il est pratique de réduire les produits filtrés, employés à l'analyse, aux quantités, correspondant à 0,1–0,2 g. de tissu.

• 2° La méthode élaborée parSt. E. Kerr etE. M. Blish pour déterminer les nucléotides libres, ainsi que les nucléosides dans le sang et les muscles, donne souvent des résultats trop hauts, si on fait l'analyse d'autres tissus, où très souvent d'autres composants azoteux sont adsorbés par les précipités divers. L'auteur prouva l'influance qu'a l'addition de phosphate sur la précipitation des nucléotides avec l'urane, ainsi que l'influence d'une trop grande concentration de cuivre sur la précipitation des purines avec l'hydroxyde de cuivre. Pour éviter toutes ces fautes, l'auteur propose une modification de la méthode deKerr etBlish.

• 3° L'auteur indique une méthode, pour doser la purine dans l'acide nucléinique, la nucléotide libre, la nucléoside et la purine, l'une à côté de l'autre dans la même portion de tissu.