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Fracture faces in intact cells and protoplasts ofBacillus stearothermophilus. A study by conventional freeze-etching and freeze-etching of corresponding fracture moieties

Bruchflächen in intakten Zellen und Protoplasten vonBacillus stearothermophilus. Eine Untersuchung mit Hilfe der konventionellen Gefrierätzung und der Gefrierätzung korrespondierender Bruchhälften

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Summary

The cytoplasmic membrane in intact cells and protoplasts ofBacillus stearothermophilus was investigated by means of thin sectioning, conventional freeze-etching and freeze-etching of corresponding fracture moieties. Two different membrane views are obtained in freeze-etching of intact cells as well as of protoplasts. This requires the adoption of a concept of membran cleaving along a central plane. Temperature-dependent differences in fracturing processes either at −100° C or at −196° C were not observed. Deep-etching (5–10 minutes at −95° till −98° C) coarsens membrane structures. Both fracture halves of the membrane are covered with particles of 5 to 10 nm in diameter, regionally showing a paracrystalline array. Membrane structures of vesicles (remnants of mesosomes), observed in freeze-etched protoplasts, are explained as resulting from cleaving along a central plane.

Zusammenfassung

Die Cytoplasmamembran intakter Zellen und Protoplasten vonBacillus stearothermophilus wurde mit Hilfe der Ultradünnschnittechnik, der normalen Gefrierätzung und der Gefrierätzung korrespondierender Bruchhälften untersucht.

Bei der Gefrierätzung intakter Zellen und Protoplasten konnten jeweils zwei Membranansichten mit unterschiedlicher Struktur zur Darstellung gebracht werden. Diese Befunde sowie die Ergebnisse der Gefrierätzung korrespondierender Bruchhälften von Protoplasten beweisen, daß die Cytoplasmamembran entlang einer zentralen Ebene aufgespalten wird.

Beide Membranbruchflächen sind mit 5–10 nm großen Partikeln besetzt, die lokal eine parakristalline Ordnung aufweisen. Unterschiede im Bruchverhalten der Cytoplasmamembran bei −100° C und −196° C wurden nicht festgestellt. Durch Tiefätzung (5–10 Minuten bei −95° bis −98° C) trat eine Vergröberung der Membranstrukturen auf.

Die in gefriergeätzten Protoplasten dargestellten vesikulären Membranstrukturen (Reste der unvollständig ausgestoßenen Mesosomen) werden analog zu der Cytoplasmamembran mit einer Spaltung der Membran entlang einer zentralen Ebene erklärt.

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References

  • Abram, D., 1965: Electron microscope observations on intact cells, protoplasts, and the cytoplasmic membrane ofBacillus stearothermophilus. J. Bact.89, 855–873.

    Google Scholar 

  • —,A. E. Vatter, andH. Koffler, 1966: Attachment and structural features of flagella of certain bacilli. J. Bact.91, 2045–2068.

    Google Scholar 

  • Aldrian, A., und W.Geymeyer, 1969: Über die Vermeidung von Erwärmung und Kontamination beim Transport gefriergeschockter Präparate. Joint Conf. of the Austrian and German Societies of Ultrastruct. Res. and Electron Microscopy, Vienna, L 4.

  • Bodman, H., andN. E. Welker, 1969: Isolation of spheroplast membranes and stability of spheroplasts ofBacillus stearothermophilus. J. Bact.97, 924–935.

    Google Scholar 

  • Branton, D., 1966: Fracture faces of frozen membranes. Proc. nat. Acad. Sci. (U.S.A.)55, 1048–1056.

    Google Scholar 

  • Brock, T. D., 1967: Life at high temperatures. Science158, 1012–1019.

    Google Scholar 

  • Campbell, L. L., andB. Pace, 1968: Physiology of growth at high temperatures. J. appl. Bact.31, 24–35.

    Google Scholar 

  • Clark, A. W., andD. Branton, 1968: Fracture faces in frozen outer segments from the guinea pig retina. Z. Zellforsch.91, 586–603.

    Google Scholar 

  • Farrell, J., andA. Rose, 1967: Temperature effects on microorganisms. Ann. Rev. Micro-biol.21, 101–120.

    Google Scholar 

  • Fiil, A., andD. Branton, 1969: Changes in the plasma membrane ofEscherichia coli during magnesium starvation. J. Bact.98, 1320–1327.

    Google Scholar 

  • Fischlschweiger, W., 1962: Über die Verwendung von Viapal-Kunstharz in der Elektronen-mikroskopie. Mikroskopie (Vienna)17, 341–344.

    Google Scholar 

  • Friedman, S. M., 1968: Protein-synthesizing machinery of thermophilic bacteria. Bacter. Rev.32, 27–38.

    Google Scholar 

  • Geymeyer, W., 1966: Die gleichzeitige elektronenmikroskopische Erfassung von Oberfläche und Querschnitt gefriergeschockter kolloidaler Systeme. VI. Int. Congr. Electron Micros-copy, Kyoto I, p. 577.

    Google Scholar 

  • — 1967: Die elektronenmikroskopische Untersuchung temperaturempfindlicher Kolloide. Staub-Reinhakung d. Luft27, 237–240.

    Google Scholar 

  • Holt, S. C., andE. R. Leadbetter, 1969: Comparative ultrastructure of selected aerobic sporeforming bacteria: a freeze-etching study. Bact. Rev.33, 346–378.

    Google Scholar 

  • Kellenberger, E., A. Ryter, andJ. Sechaud, 1958: Electron microscope study of DNA-containing plasms. II. Vegetative and mature DNA as compared with normal bacterial nucleoids in differing physiological states. J. biophys. biochem. Cytol.4, 671–676.

    Google Scholar 

  • Koffler, H., 1957: Protoplasmic differences between mesophiles and thermophiles. Bact. Rev.21, 227–240.

    Google Scholar 

  • Manning, G. B., andL. L. Campbell, 1961: Thermostable α-amylase ofBacillus stearo-thermophilus. I. Crystallization and some general properties. J. biol. Chem.236, 2952 to 2957.

    Google Scholar 

  • Matile, Ph., H. Moor, andK. Mühlethaler, 1967: Isolation and properties of the plasmalemma in yeast. Arch. Mikrobiol.58, 201–211.

    Google Scholar 

  • Meyer, H. W., undH. Winkelmann, 1969: Die Gefrierätzung und die Struktur biologischer Membranen. Protoplasma68, 253–270.

    Google Scholar 

  • Moor, H., 1964: Die Gefrier-Fixation lebender Zellen und ihre Anwendung in der Elektronenmikroskopie. Z. Zellforsch.62, 546–580.

    Google Scholar 

  • Munoz, E., J. F. Freer, D. J. Ellar, andM. R. J. Salton, 1968: Membrane-associated ATP-ase activity fromMicrococcus lysodeikticus. Biochem. biophys. Acta150, 531–533.

    Google Scholar 

  • Nanninga, N., 1968: Structural features of mesosomes (chondrioids) ofBacillus subtilis after freeze-etching. J. Cell Biol.39, 251–263.

    Google Scholar 

  • Nečas, O., M. Kopecká, andJ. Brichta, 1969: Interpretation of surface structures in frozen-etched protoplasts of yeasts. Exp. Cell Res.58, 411–419.

    Google Scholar 

  • Pinto da Silva, P., andD. Branton, 1970: Membrane splitting in freeze-etching. J. Cell Biol.45, 598–605.

    Google Scholar 

  • Remsen, C. C., 1966: The fine structure of frozen-etchedBacillus cereus spores. Arch. Mikrobiol.54, 266–275.

    Google Scholar 

  • — 1968: Fine structure of the mesosome and nucleoid in frozen-etchedBacillus subtilis. Arch. Mikrobiol.61, 40–47.

    Google Scholar 

  • — andD. C. Lundgren, 1966: Electron microscopy of the cell envelope ofFerrobacillus ferrooxidans prepared by freeze-etching and chemical fixation techniques. J. Bact.92, 1765–1771.

    Google Scholar 

  • —,F. W. Valois, andS. W. Watson, 1967: Fine structure of the cytomembranes ofNitrosocystis oceanus. J. Bact.94, 422–433.

    Google Scholar 

  • Reynolds, E. S., 1963: The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy. J. Cell Biol.17, 208–212.

    Google Scholar 

  • Richter, H., undU. Sleytr, 1970: Gefrierätzung des Assimilationsparenchyms vonAsparagus sprengeri Regel. Mikroskopie (Vienna)26, 329–346.

    Google Scholar 

  • Rotman, Y., andM. L. Fields, 1966: Structure of spores of rough and smooth variants ofBacillus stearothermophilus with special reference to their heat resistance. J. Fd. Sci.31, 437–440.

    Google Scholar 

  • Sleytr, U., (1970 a): Gefrierätzung verschiedener Stämme vonBacillus sphaericus. Arch. Mikrobiol.72, 238–251.

    Google Scholar 

  • —, (1970 b): Die Gefrierätzung korrespondierender Bruchhälften: ein neuer Weg zur Aufklä-rung von Membranstrukturen. Protoplasma70, 101–117.

    Google Scholar 

  • —,H. Adam, undH. Klaushofer, 1967: Die elektronenmikroskopische Feinstruktur von Zellwand, Cytoplasmamembran und Geißeln vonBacillus stearothermophilus, dargestellt mit Hilfe der Gefrierätztechnik. Mikroskopie (Vienna)22, 233–242.

    Google Scholar 

  • — — — 1968: Die Feinstruktur der Zellwandoberfläche von zwei thermophilen Clostridienarten, dargestellt mit Hilfe der Gefrierätztechnik. Mikroskopie (Vienna)23, 1–10.

    Google Scholar 

  • — — — 1969: Die Feinstruktur der Zellwand und Cytoplasmamembran vonClostridium nigrificans, dargestellt mit Hilfe der Gefrierätz- und Ultradünnschnittechnik. Arch. Mikrobiol.66, 40–58.

    Google Scholar 

  • Staehelin, A., 1968: The interpretation of freeze-etched artificial and biological membranes. J. Ultrastruct. Res.22, 326–347.

    Google Scholar 

  • Sutow, A. B., andN. E. Welker, 1967: Chemical composition of the cell walls ofBacillus stearothermophilus. J. Bact.93, 1452–1457.

    Google Scholar 

  • Tillack, T. W., andV. T. Marchesi, 1970: Demonstration of the outer surface of freeze-etched red blood cell membranes. J. Cell Biol.45, 649–653.

    Google Scholar 

  • Walker, P. D., andA. Baillie, 1968: Structure ofBacillus stearothermophilus: An electron microscope study. J. appl. Bact.31, 108–113.

    Google Scholar 

  • Warth, A. D., D. F. Ohye, andW. G. Murrell, 1963: Location and composition of spore mucopeptide inBacillus species. J. Cell Biol.16, 593–609.

    Google Scholar 

  • Weinstein, R. S., andV. M. Koo, 1968: Penetration of red cell membranes by some mem-branessociated particles. Proc. Soc. exp. Biol. Med.128, 353–357.

    Google Scholar 

  • Welker, N. E., andL. L. Campbell, 1965: Induction and properties of a temperate bac-teriophage fromBacillus stearothermophilus. J. Bact.89, 175–184.

    Google Scholar 

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Sleytr, U.B. Fracture faces in intact cells and protoplasts ofBacillus stearothermophilus. A study by conventional freeze-etching and freeze-etching of corresponding fracture moieties. Protoplasma 71, 295–312 (1970). https://doi.org/10.1007/BF01279638

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