Inhibitors of human and bovine trypsin and chymotrypsin in fenugreek (Trigonella foenum-graecum L.) seeds

Zusammenfassung

Die reaktiven Zentren und C-terminalen Sequenzen dreier Trypsin-Chymotrypsin-Inhibitoren aus Bockshornkleesamen (TFI-B2, TFI-N2 und TFIA8) wurden durch chemische Modifizierung sowie Abbau der nativen und enzymatisch modifizierten Inhibitoren mit Carboxypeptidase bestimmt. TFI-B2 enthält Lysin im trypsin- und Leucin im chymotrypsin-reaktiven Zentrum sowie-(Lys)-Phe-Leu-Ile als C-terminale Sequenz. TFI-N2 hat Arginin im trypsin- und Leucin im chymotrypsin-reaktiven Zentrum sowie-(Tyr)-Lys-Ile-Leu im C-Terminus. TFI-A8 enthält zwei Arginine, eines in jedem der beiden reaktiven Zentren. Mindestens eines dieser Zentren, obgleich hauptsächlich gegen Trypsin gerichtet, kann auch in geringerem Umfang Chymotrypsin binden. Die C-terminale Sequenz von TFI-A8 ist-(Leu)-Phe-Ile-Arg. Diese Ergebnisse bestätigen, daß alle drei Bockshornklee-Inhibitoren zur Familie der Bowman-Birk-Proteinaseinhibitoren gehören.

Summary

The reactive sites and the C-terminal sequences of three trypsin chymotrypsin inhibitors from fenugreek seeds (TFI-B2, TFI-N2, and TFI-A8) were determined by chemical modification and carboxypeptidase degradation of native und enzymatically modified inhibitors. TFI-B2 contained lysine and leucine in the trypsin- and chymotrypsin-reactive sites, respectively, and -(Lys)-Phe-Leu-Ile was the C-terminal sequence. TFI-N2 possessed arginine and leucine in the trypsinand chymotrypsin-reactive sites, respectively, and -(Tyr)-Lys-Ile-Leu at the C-terminus. TFI-A8 contained two arginines, one in each of the two reactive sites. At least one of these sites, although mainly directed against trypsin, could also bind some chymotrypsin. -(Leu)-Phe-Ile-Arg was found to be the C-terminus in TFI-A8. These results confirmed that all three fenugreek inhibitors belong to the Bowman-Birk proteinase inhibitor family.