Bestimmung der einzelnen Purin- und Pyrimidinbasen in kohlenhydratreichen Lebensmitteln

Summary

The following method was developed for the qualitative and quantitative determination of purine and pyrimidine bases in carbohydrate rich food: The bases were liberated from nucleic acids, nucleotides or nucleosides by acid hydrolysis in a pressure digestion vessel. A complete liberation without losses of purine bases occurs upon hydrolysis for 15 min at 240°C with trifluoroacetic and formic acids (1 + 1; V + V), pyrimidine bases need 45 min at 240°C. The products arising from side reactions (such as hydroxymethylfurfural from hexoses and furfural from pentoses) could be removed from the hydrolysate by extraction with dichlormethane.

The liberated bases could be separated upon stepwise elution by cation exchange chromatography. They were detected and determined by UV measurements, continuously monitoring at λ = 260 nm, and integrating electronically. The evaluation was carried out by a method with internal standard.

Zusammenfassung

Zur qualitativen und quantitativen Bestimmung der Purin- und Pyrimidinbasengehalte in kohlenhydratreichen Lebensmitteln wurde folgende Methode entwickelt:

Die Basen aus den Nucleinsäuren, Nucleotiden oder Nucleosiden werden durch saure Hydrolyse mit Trifluoressigsäure/Ameisensäure-Gemisch (1 + 1; V + V) in einem Druckaufschlußsystem freigesetzt. Für eine vollständige und verlustfreie Freisetzung der Purinbasen ist eine Hydrolysezeit von 15 min bei 240°C ausreichend; für die Pyrimidinbasen sind 45 min bei 240°C erforderlich. Die hierbei entstandenen Nebenprodukte (wie Hydroxymethylfurfural aus Hexosen und Furfural aus Pentosen) können durch Extraktion der Hydrolysate mit Dichlormethan weitgehend beseitigt werden.

Durch stufenweise Elution über Kationenaustauscherharz werden die freigesetzten Basen getrennt und mittels kontinuierlicher UV-Messung bei λ=260 nm qualitativ und quantitativ bestimmt. Die Auswertung erfolgt durch elektronische Integration nach dem Verfahren des Internen Standards.