Development and Characterization of SV40 Large T Immortalized Endothelial Cells of the Rat Blood-Brain and Blood-Retinal Barriers

Summary

In a series of recent reports an immortalised rat brain endothelial cell line (RBE4) has been described that has proved to be a valuable resource for studying the properties of cerebral endothelia. Using a different approach, we have developed immortalised endothelial cell lines derived from primary cultures of both rat brain and rat retina. Cells were immortalised using virus containing supernatants generated from producer cells containing a replication deficient SV40 retrovirus encoding the tsa58 large T-antigen and a neomycin selectable marker. Parent lines of brain (IO/GP8) and retinal (IO/JG2) which were resistant to exposure to G418 were expanded and cloned by limiting dilution. Using morphological criteria one brain (IO/GP8/3) and one retinal (IO/JG2/1) clone was expanded for further investigation. The clones stained positive for the presence of large-Tantigen. Fixed cell ELISA and flow cytometry demonstrated that the immortalised cells expressed antigens specific to CNS-derived endothelial cells and could be induced to produce other immunologically important molecules such as MHC class II, ICAM-1 and VCAM-l.

Résumé

Une Série de récents rapports mentionnent l’utilisation d’une lignée immortalisée de cellulles endothéliales, isolée à partir du cerveau de rat, comme modèle cellulaire approprié pour l’étude in vitro, des propriétés de l’endothélium cérébral. En utilisant une approche différente, nous avons développé de notre côté, deux lignées immortalisées de cellules endothéliales de rat dérivées de cultures primaires à partir du cerveau, d’une part et de la rétine, d’autre part. Ces cellules ont été immortalisées par l’utilisation d’une souche déficiente du retrovius SV40, contenu dans des surnageants de culture de cellules infectées et codant pour l’antigène T sous contrôle du gène néomycine. Deux lignées parentales furent isolées, (IO/GP8) et (IO/JG2) à partir du cerveau et de la rétine, respectivement, après culture en présence de G418- Elles furent utilisées pour l’expansion et le clonages par dilution limite. En utilisant alors des critères morphologiques, nous avons dérivé deux lignées IO/GP8/3 à partir du cerveau et IO/JG2/1 à partir de la rétine, pour de futures investigations. Ces deux clônes se révèlent positifs pour l’expression de l’antigène T. De plus, des ELISA réalisés sur cellules fixées et des études complémentaires de cytométrie de flux confirment l’expression des antigènes spécifiques de cellules endothéliales du système nerveux central. Aussi, est-il possible sur ces cellules d’induire l’expression d’autres molécules d’intérêt immunologique comme les molécules de classe Il du CMH, ICAM-1 et VCAM-1.