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Simple Western Blotting

  • R. WestermeierEmail author
Chapter
Part of the Springer Reference Medizin book series (SRM)

Synonym(e)

 Simple Western

Englischer Begriff

Simple Western blotting

Definition

Patentierte Methode der Immundetektion von Antigenen nach elektrophoretischer Trennung und Immobilisierung der Proteinfraktionen in Kapillaren.

Physikalisch-chemisches Prinzip

Beim Simple Western Blotting erfolgt die Trennung des Proteingemisches mittels einer Kapillarelektrophorese, bei der die innere Kapillarwand mit einer Substanz beschichtet ist, die bei Lichtaktivierung die getrennten Proteinfraktionen bindet. Anschließend folgt eine Immundetektion mit Primär- und Sekundärantikörpern durch Inkubieren und Waschen der Kapillare. Die Sekundärantikörper sind mit Meerrettichperoxidase konjugiert; die Detektion erfolgt über Chemilumineszenz. Alle Schritte sind automatisiert. Die Trennung kann nach 2 verschiedenen Prinzipien durchgeführt werden: entweder durch eine isoelektrische Fokussierung zur Trennung nach den isoelektrischen Punkten oder eine SDS-Elektrophorese zur Trennung nach Molekülgrößen.

Einsatzgebiet

Proteinbestimmungen.

Untersuchungsmaterial

Biologische Flüssigkeiten, Gewebeextrakte, Zelllysate.

Instrumentalisierung

Vollautomatisierte Apparatur der Firma ProteinSimple.

Spezifizität

Hoch, da die Methode auf Immunreaktion beruht.

Sensitivität

Im Bereich niedriger Picogramm bis hoher Femtogramm.

Fehlermöglichkeit

Diese Technik funktioniert vollautomatisch, der Aufwand für die Probenvorbereitung ist minimal. Dadurch wenig Fehler möglich.

Praktikabilität – Automatisierung – Kosten

Gerät und Kapillarkits gibt es nur bei der Firma ProteinSimple, der Inhaberin der Patente.

Bewertung – Methodenhierarchie (allg.)

Geeignet für klinisch-chemische Labore mit hohem Probendurchsatz.

Literatur

  1. Nguyen U, Squaglia N, Boge A, Fung PA (2011) The Simple Western™: a gel-free, blot-free, hands-free Western blotting reinvention. Nat Methods 8:v–viGoogle Scholar

Copyright information

© Springer-Verlag GmbH Deutschland, ein Teil von Springer Nature 2019

Authors and Affiliations

  1. 1.FreisingDeutschland

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