Vergleichende In-vitro-Analyse von primären und immortalisierten Keratozyten

Zusammenfassung

Hintergrund

Die Kultivierung von primären Keratozyten (HCKp) ist schwierig und wird multifaktoriell beeinflusst. Untersucht wurde, ob immortalisierte Keratozyten (HCKi) diese in Versuchen ersetzen und beim Aufbau eines Kornea-Äquivalents nützlich sein können.

Material und Methoden

HCKp und HCKi wurden kultiviert und mit Benzalkoniumchlorid (BAC) oder Cetrimid für 72 h in den Konzentrationen 40–0,1 μg/ml bzw. 100–0,01 μg/ml behandelt. Es wurden die Vitalität und die Verdopplungszeit (tv) bestimmt.

Ergebnisse

40 bzw. 4 μg/ml BAC sowie 100 bzw. 10 μg/ml führten zu einem Absterben der Zellen. Die tv war insgesamt bei den HCKi verkürzt, insbesondere jedoch bei mit BAC behandelten Zellen, wobei nur die HCKp hierbei einen signifikanten Vitalitätsverlust zeigten. Bei den mit Cetrimid behandelten Zellen stieg die tv in beiden Zellreihen signifikant an, wobei in beiden Zellreihen ab 0,1 μg/ml kein Vitalitätsverlust mehr nachweisbar war.

Schlussfolgerung

Insgesamt sind HCKi widerstandsfähiger und proliferativer als HCKp. Sie können jedoch in Vorversuchen als Ersatz für primäre Zellen in Toxizitätsstudien etc. unter Berücksichtigung der vorhandenen Unterschiede beider Zellreihen, wie Proliferationskapazität und Reaktion auf Substanzen, eingesetzt werden.

Abstract

Background

The cultivation of primary keratocytes (HCKp) is difficult and influenced by a multitude of factors. In this study it was examined if immortalized keratocytes (HCKi) can replace HCKp in experiments and be useful in the development of a cornea construct.

Methods

HCKp and HCKi were cultivated and incubated for 72 h with benzalkonium chloride (BAC) or cetrimide at concentrations of 40-0.1 μg/ml or 100–0.01 μg/ml. The vitality and the doubling time (tv) were measured.

Results

Treatment with 40 or 4 μg/ml BAC as well as 100 or 10 μg/ml cetrimide led to cell death. The tv was shortened in HCKi especially in cells that were treated with BAC, but only HCKp showed a significant loss of vitality. In cells treated with cetrimide the tv increased significantly in both cell lines and no loss of vitality was detected from 0.1μg/ml onwards in both cell lines.

Conclusion

HCKi are more resistant and proliferative than HCKp but they can be used in preliminary experiments as an alternative to primary cells in for example toxicity studies if the detectable differences between the two cell lines, such as the capacity for proliferation and reaction to agents are taken into consideration.