Differenzielle Regulation der Expression von PDGF-Rezeptoren auf kornealen Epithelzellen

Zusammenfassung

Hintergrund. Die Funktion des Wachstumsfaktors “platelet-derived growth factor” (PDGF) im Rahmen der kornealen Wundheilung ist bislang nicht genau bekannt. Frühere Studien haben nachweisen können, dass die mRNA des PDGF-Rezeptors Typ α (PDGFRα) und des PDGF-Rezeptors Typ β (PDGFRβ) in kultivierten kornealen Epithelzellen (CEP) exprimiert wird. Um diese Erkenntnisse zu ergänzen, verglichen wir im Rahmen der vorliegenden Studie sowohl die Expression der mRNA als auch die Expression des Proteins beider Rezeptorsubtypen in CEP in vitro und in CEP ex vivo.

Methoden. Gesamt-RNA und -Protein wurden aus kultivierten humanen CEP und aus CEP ex vivo unter Verwendung von Standardprotokollen extrahiert. Die “Reverse-transcription polymerase chain reaction” (RT-PCR) wurde für die Messung der mRNA von PDGF-Rezeptor Typ α und Typ β verwendet. Die Proteinexpression der PDGF-Rezeptoren wurde mittels Western Blot ermittelt.

Ergebnisse. Während in kultivierten CEP, wie erwartet, PCR-Produkte für die mRNA beider PDGF-Rezeptoren und im Western Blot die entsprechenden Proteine detektiert werden konnten, waren in CEP ex vivo weder die mRNA noch das Protein von PDGFRα und PDGFRβ nachweisbar.

Schlussfolgerung. Die vorliegende Studie zeigt erstmals, dass die mRNA und das Protein beider PDGF-Rezeptor-Subtypen auf kultivierten humanen CEP, nicht aber auf CEP ex vivo exprimiert werden. Die Hochregulierung des PDGF-Rezeptors im Rahmen der Aktivierung der Epithelzellen könnte von pathophysiologischer Bedeutung sein.

Abstract

Background. The function of platelet-derived growth factor (PDGF) during corneal wound healing is only incompletely understood to date. Previous studies have shown that the mRNA of PDGF receptor type α (PDGFRα) and type β (PDGFRβ) is expressed in cultured corneal epithelial cells (CEP). To add to the current knowledge, the following study was designed to compare the expression of mRNA and protein of both PDGF receptor subtypes in cultured CEPs and in CEPs ex vivo.

Methods. Total RNA and protein were extracted from cultured CEPs and from CEPs ex vivo according to standard protocols. The reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was applied to detect specific expression of the mRNA of PDGFRα and PDGFRβ. The expression of the corresponding proteins was detected using Western blotting.

Results. MRNA and protein of both PDGF receptor subtypes could be detected in cultured CEPs but not in CEPs ex vivo.

Conclusion. The present study shows for the first time that mRNA and protein of both PDGF receptor subtypes are expressed in cultured human corneal epithelial cells, while corneal epithelial cells ex vivo do not express these receptors. The differential up-regulation of PDGF receptors in activated cells during wound healing could be of pathophysiological importance.