Souhrn
Byla vyzkoušena metoda, kterou lze uchovávat vzorky listů po 1 až 3 měsíce, aniž poklesne množství chlorofylu (a+b) o více než 5% respektive o 10%:
Kotoučky o průměru 8 mm, vyříznuté z listů, se po 10 až 15 dají do zkumavek velikosti 10 až 12×85 až 110 mm. Přidá se špetka MgCO3 a 2 ml bezvodého předestilovaného acetonu. Zkumavka se asi do poloviny ponoří do vody teplé cca +80°C. Jakmile se aceton začne vařit, zkumavka se rychle uzavře zátkou prosycenou teplým parafinem a ochladí se ponořením do studené vody. Zkumavky se skladují ve tmě při teplotách okolo 0°C.
Probíhající změny v obsahu barviv nesníží výsledky kolorimetrického stanovení, pokud nejde o kyselá pletiva (begonie, červené odrůdy krmné kapusty). Metoda je rychlá, provozní a lepší než ostatní zkoušené jednoduché postupy. Osvědčila se pro tykev slunečnici, krmnou kapustu (některé odrůdy), cukrovku, jetel a tabák. Lze jí užít s výhodou pro analysu chlorofylu při zemědělských pokusech většího rozsahu.
Summary
In the course of experiments with leaf samples of pumpkin, sunflower, leafy fodder kale, sugar beet, tobacco, clover and begonia several, methods of storing material were compared with the object of determining the amount of chlorophyll (a+b) after 1 to 3 months. Chlorophyll analyses checked by paper chromatography provided evidence that the most reliable method of serial analyses is the following: Leaf discs are heated in very pure anhydrous acetone to its boiling point (with some MgCO3 present), rapidly closed with a paraffin stopper and then kept in the dark at temperatures just above 0°C. 50 leaf samples can thus be prepared for storage within 30 minutes. The decrease in total chlorophyll (a+b) content after 28 days of storage does not exceed 5%, after 84 days of storage 10% of the initial value. Chemical conversions of chlorophyll take place here which do not appreciably affect the spectrum of the acetone extract. The method cannot be applied to plants with acid-reacting cell juice (begonia, red varieties of fodder kale and the like). Other practicable methods of storage (a different storage in acetone, storage of fresh samples at +2 to +3°C, drying at +50°C, storage at laboratory temperature) bring about more serious destruction of the pigments.
Резюме
Был испытан метод, при помощи которого можно сохранить образцы листьев в течениц 1–3 месяцев, без снижения количества хлорофилла (a+b) больше чем на 5–10%.
Диски диаметром в 8 мм, вырезанные из листьев по 10–15 штук помещались в пробирки, размером 10–12×85–110 mm. Прибавлялось немного MgCO3 и 2 мл безводного дистиллированного ацетона. Пробирка погружается в воду, нагретую примерно до 80°С. Как толяко ацетон начнет кипеть, пробирка быстро затыкается пробкой, насыщенной теплым парафином, и охлаждается погружением в холодную воду. Пробирки хранятся в темноте при температуре около 0°С.
Происходящие изменения в составе пигментов не снижаут данные колориметрических измерений, за исключением кислых тканеи (бегония, красные сорта кормовой капусты). Этот метод быстрее и лучше, чем остальные испытанные простые приемы. Он оказался очень удобным для работы с тыквой, подсолнечником, кормовой капустой (некоторые сорта), сахарной свеклой, клевером и табаком. Его можно успешно использовать для анализа хлорофилла чри сельскохозяйственных опытах широкого масштаба.
References
Angapindu, A., Silberman, H., Tantivatana, P., Kaplan, I. R.: The separation of chloro phylls by paper and cellulose column chromatography.—Arch Biochem. Biophys.75: 56–68, 1958.
Chiba, Y., Noguchi, I.: A new method of paper chromatography of chlorophylls.—Cytologia19: 41–44, 1954.
Cosgrove, F. P., Guth E. P.: Carbohydrate and chlorophyll content of leaves of Digitalis purpurea L. and Digitalis lutea L. after freeze-drying and oven-drying.—J. amer. pharm. Ass. (sci. Ed.)43: 268–269, 1954.
Deleano, N. T., Dick, J.: Über den Chorophyllverlust trockender Laubblätter und über Chlorophyllextraktion. —Biochem. Z.300: 37–41, 1938.
Drawert, H.: Der pH-Wert des Zellsaftes.—In: Handbuch der Pflanzenphysiologie, Bd. I. Pp. 627–648. Springer, Berlin-Göttingen-Heidelberg, 1955.
Dutton, H. J., Bailey, G. F., Kohake, E.: Dehydrated spinach Changes in color and pigments during processing and storage.—Ind. Engng Chem.35: 1173–1177, 1943.
Genest, C.: Verhalten des Chlorophylls im Spinat bei der Kammer- und Zerstäubungstrocknung. —Dtsch. Lebensmittel-Rdsch.51: 200–203, 1955.
Guthrie, J. D.: Effect of environmental conditions on the, chloroplast pigments.—Amer. J. Bot.16: 716–746, 1929.
Hager, A.: Chloroplasten-Farbstoffe, ihre papierchromatographische Trennung und ihre Veränderungen durch Aussenfaktoren.—Z. Naturforsch.10b: 310–312, 1955.
Harberts, C. L., Immink, H. J., Deijs, W. B.: Het chlorophylgehalte van gras in de loop van het weide-seizoen.—Verslag C. I. L. O. over 1954; 228–230, 1955.
Harriman, P. A.: Effect of various methods of storage on chlorophyll content of leaves.— Plant Physiol.5: 599–606, 1930.
Holt, A. S., Jacobs, E. E.: Spectroscopy of plant pigments. I. Ethyl chlorophyllides A and B and their pheophorbides.—Amer. J. Bot.41: 710–717, 1954.
Mary, N. Y., Christensen, B. V., Beal, J. L.: The effect of freeze drying on chlorophyll in the leaves of some selected drug plants.—J. amer. pharm. Ass. (sci. Ed.)43: 554–557, 1954.
Maslova, T. G.: K voprosu o sostoyanii khlorofilla v plastidakh zelenykh rasteny. [Concerning the problem of chlorophyll composition in green-plant plastids.] Bot. Zh. AN SSSR43: 103–106, 1958.
McNulty, I. B., Newman, D. W.: The effects of a lime spray on the respiration rate and chlorophyll content of leaves exposed to atmospheric fluorides.—Utah Acad. Proc.33: 73–79, 1956.
Osipova, O.: Ob izvlekaemosti khlorofilla iz zelenykh rasteny. [Extractability of chlorophyll from green plants.] Dokl. AN SSSR57: 799–801, 1947.
Scott, L. E., Kramer, A.: Physiological changes in Asparagus after harvest.—Amer. Soc. hort. Sci. Proc.54: 357–366, 1949.
Šesták, Z.: Paper chromatography of chloroplast pigments.—J. of Chromatography1: 293–308, 1958; Chromatographic Reviews1: 193–208, 1959.
Strain, H. H.: Oxidation and isomerization reactions of the chlorophylls in killed leaves.— Agric. Food Chem.2: 1222–1226, 1954.
Wagenknecht, A. C.: Deterioration in quality of frozen raw peas during storage.—Quick Frozen Foods14: 49–51, 1952.
Wagenknecht, A. C., Lee, F. A., Boyle, F. P.: The loss of chlorophyll in green peas during frozen storage and analysis.—Food Res.,17: 343–350, 1952.
Willstätter, R., Stoll, A.: Untersuchungen über Chlorophyll. Pp. 53–56. J. Springer, Wien, 1913.
Zscheile, F. P., Comar, C. L., Harris, D. G.: Spectroscopic stability of chlorophylls a and b and certain analytical considerations.—Plant Physiol.19: 627–637, 1944.
Author information
Authors and Affiliations
Rights and permissions
About this article
Cite this article
Šesták, Z. A method of storage of leaf samples for chlorophyll analysis. Biol Plant 1, 287–294 (1959). https://doi.org/10.1007/BF02920848
Received:
Issue Date:
DOI: https://doi.org/10.1007/BF02920848