Количественная оценка серологических реакций путем измерения помутнения в сравнительной серологии растений

Souhrn

V této metodické práci uvádíme praktický postup při použití kvantitativní sérologické metody, drobné modifikace a technické úpravy tohoto postupu se zvláštním zřetelem k umožnění práce s labilními rostlinnými bílkovinami, zejména z vegetativních orgánů.

Vycházíme z osvědčené metody, propracovanéBoydenem a spolupracovníky a za použitíLibbyho “photronreflectometru”. V práci uvádíme výsledky, kterými jsme si ověřovali vhodnost a vliv zejména těchto našich drobných modifikací na kvantitativní vyhodnocování sérologických reakcí:

• a) Použití “acetonových preparátů” při přípravě antigenů: Jedinou operací se zbavíme značné části nežádoucích příměsí jako jsou lipidy, organické kyseliny, tanin, alkaloidy apod., při zachování antigenní aktivity bílkovinného materiálu. Zároveň tím značně zvýšíme jeho uchovatelnost v suchém stavu na řadu měsíců.

• b) Stabilisace roztoků rostlinných antigenů přídavkem 5% fruktosy. Tím zabráníme podstatně denaturaci rostlinných bílkovin v roztocích uchovávaných zmrznutím a zvýšíme použitelnost roztoků rostlinných antigenů na řadu dní.

• c) Úprava inkubační body a inkubační teploty při provádění kvantitativní precipitace za účelem lepší standardisace práce; zároveň snížení dávek antiséra.

• d) Standardisace cejchováníLibbyho “photronreflectometru”.

• e) PoužitíRungeho fysiologického roztoku; dále kyseliny askorbové k omezení tvorby melaninů u antigenních extraktů z rostlinného materiálu.

Резюме

В статье описаны практические приемы количественного серологического метода и мелкие технические видоизменения данного метода, позволяюшие работать с лабильными растительными белками, в особенности с белками, полученными из вегетативных органов растений.

Работа основана на проверенном методе, разработанном Бойденом и его сотрудниками, применившими «фотронрефлектометр» Либби. Ниже приводятся результаты измерений, проводившихся прежде всего с целью проверки наших новых видоизменений этого метода и их влияния на количественную оценку серологических реакций:

• а) Применение «ацетоновых препаратов» в процессе приготовления антигенов. При помщи одного единственного приема можно избавиться от большей части вредных примесей, которыми являются липиды, органические кислоты, танин, алкалоиды и т. п., при сохранении антигенных свойств белкового материала. Одновременно значительно повышается его способность к хранению в сухом виде в течение ряда месяцев.

• б) Стабилизация растворов растительных антигенов прибавлением 5% фруктозы. Последняя существенно противодействует денатурации растительного белка в растворах, хранимых в замороженном виде. Срок, в течение которого указанные растворы сохраняются в применимом виде, таким образом можно продлить на несколько дней.

• в) Видоизменения времени и температуры инкубации при количественной преципитации с целью лучшей стандартизации работы; одновременно снижение доз антигенной сыворотки.

• г) Стандартизации градуирования «фотронрефлектометра» Либби.

• д) Применение физиологического раствора Рунге; прибавление аскорбиновой кислоты с целью торможения образования меланинов в антигенных экстрактах из растительного материала.

Summary

A technical procedure is described together with slight modifications and technical alternations, for the application of the quantitative serological method in work with labile plant proteins, particularly those from vegetative organs.

The procedure is based on the well-known method developed byBoyden et al., usingLibby's “photronreflectometer”. The results published here have been obtained in the course of the determination of applicability of the following modifications to a quantitative evaluation of serological reactions:

• a) The use of “acetone preparations” in obtaining antigens: A single operation is sufficient to remove undesirable admixtures, such as lipids, organic acids, tannin, alkaloids etc., the antigenic activity of the protein material being preserved. The conservability of such material in a dry state is considerably increased (for a number of months) by this procedure.

• b) Stabilization of solutions of plant antigens of adding 5% fructose: The denaturation of plant proteins in frozen solutions is thus to a high degree prevented and their applicability is prolonged for a number of days.

• c) A modification of incubation period and temperature during quantitative precipitation in order to ensure a more precise standardizing of the experimental conditions, with simultaneous decreasing of the antiserum doses.

• d) Standardization of the calibrating process ofLibby's “photronreflectometer”.

• e) Application ofRunge's physiological solution; addition of ascorbic acid to prevent melanin formation in antigen extracts from plant material.