Evaluation of the enzyme-amplified ELISA for the detection of potato viruses A, M, S, X, Y, and leafroll

Abstract

Various parameters,e.g. types of microtiter plate for DAS-ELISA (double antibody sandwich-enzyme-linked immunosorbent assay), use of fresh or frozen amplifier solutions for enzyme-amplified-ELISA, and use of sodium diethyldithiocarbamate (NaDIECA) in sample buffer in cocktail-ELISA were evaluated for the detection of potato viruses A, M, S, X, Y and leafroll from potato foliage. Dynatech Immulon immunoplates provided higher readings for all viruses. Fresh amplifier solution in amplifed-ELISA was superior to frozen solutions. Amplified ELISA gave only marginal improvement in the sensitivity over the standard DAS-ELISA. Addition of NaDIECA in sample buffer did not improve the detection of viruses in DAS-, amplified-, or cocktail-ELISA. Cocktail-ELISA can reduce antigen incubation time to as short as 15 min for PVA, PVM and PVX; 1 hr for PVY and PLRV; and 2–4 hr for PVS using pre-coated plates. Although amplified-ELISA is slightly more sensitive than DAS-ELISA for certain potato viruses, it is not suitable for large-scale indexing of potato viruses in Seed Certification Laboratories, in view of the additional steps needed in carrying out this procedure.

Compendio

Se evaluaron varios parámetros, como los tipos de placas de microtitulación para DAS-ELISA (método ELISA, tipo “sandwich” o de doble anticuerpo), el uso de soluciones amplificadoras frescas o congeladas para la aplicación de ELISA amplificada enzimáticamente, la utilizatión de dietil-ditio-carbamato de sodio (NaDIECA) en el tampón de la muestra para la aplicación de ELISA tipo “cocktail”, para la detection de los virus, A, M, S, X, Y, y del enrollamiento de la hoja (PLRV) en el follaje de la papa.

Las placas Dynatech Immulon para inmunología dieron lecturas más altas para todos los virus. La solutión amplificadora fresca en la prueba ELISA-amplificada fue superior a las soluciones congeladas. ELISA-amplificada mejoró sólo marginalmente la sensibilidad, en comparación con DAS-ELISA estándar. La adición de NaDIECA al tampón de la muestra no mejoró la detectión de los virus en DAS-amplificada o en “cocktail”-ELISA. Cocktail-ELISA puede reducir el tiempo de incubatión del antígeno haciéndolo tan corto como 15 minutos para PVA, PVM, y PVX; una hora para PVY y PLRV y 2–4 horas para PVS utilizando plaças previamente tratadas. Aunque ELISA-amplificada es ligeramente más sensible que DAS-ELISA, para algunos de los virus, no es apropiada para indexar en grandes cantidades a los virus de la papa en los laboratorios de certificacion de semilla en vista de los pasos adicionales que son necesarios para llevar a cabo este procedimiento.