Bestimmung von Vitamin B₆ in Lebensmitteln mit Hilfe der Hochdruckflüssig-Chromatographie (HPLC)

Summary

A method for the quantitative determination of vitamin B₆ in food by using high-pressure liquid chromatography and a fluorescence detector is described. The analytical method measures any vitamin B₆ compound present in food (pyridoxamine, pyridoxal, pyridoxine and their phosphoric acid esters).

Pyridoxamine (PM), pyridoxal (PL) and pyridoxine (PN) are released from the food after 30 min hydrolysis with 0.2N-sulfuric acid at 120°C. The filtered extract is applied directly to a reversed phase Spherisorb ODS column. PM, PL and PN are separated as mobile phase by using 0.08N-sulfuric acid and measured by means of the fluorescence detector (excitation: 290 nm, emission: 395 nm). Recovery rates of PM, PL and PN added to the samples were between 94 and 102% depending on the kind of food. The detection limit is 5 μg PM and 10 μg PL or PN, resp. per 100 g food. The analytical procedure is simple, specific and has many applications; the results are well reproducible.

Zusammenfassung

Eine Methode zur quantitativen Bestimmung von Vitamin B₆ in Lebensmitteln mittels Hochdruck-Flüssig-Chromatographie und eines Fluorescenzdetektors wird beschrieben. Durch das Analysenverfahren werden sämtliche in den Lebensmitteln vorkommenden Vitamin-B₆-Verbindungen (Pyridoxamin, Pyridoxal, Pyridoxin und deren Phosphorsäureester) erfaßt.

Aus den Lebensmitteln werden Pyridoxamin (PM), Pyridoxal (PL) und Pyridoxin (PN) durch Hydrolyse mit 0,2n-Schwefelsäure bei 120°C nach 30 min freigesetzt. Die gefilterte Extraktlösung wird direkt auf eine reversed phase Spherisorb ODS-Säule aufgetragen und mit 0,08n-Schwefelsäure als mobile Phase PM, PL und PN abgetrennt und am Fluorescenzdetektor (Anregung: 290 nm, Emission: 395 nm) gemessen. Die Wiederfindungsraten der den Analysenproben zugesetzten PM, PL und PN lagen je nach Art der Lebensmittel zwischen 94 und 102%. Die Nachweisgrenze ist 5 μg PM und 10 μg PL bzw. PN pro 100 g Lebensmittel. Das Analysenverfahren ist vielseitig anwendbar, relativ einfach zu handhaben, wenig störanfällig und liefert gut reproduzierbare Ergebnisse.