Application des méthodes ELISA et immunofluorescence pour la detection deCorynebacterium sepedonicum: réponses variétales de la pomme de terre au flétrissement bactérien

Résumé

Une adaptation d'une méthode ELISA à la détection deCorynebacterium sepedonicum est présentée. Trois immunsérums (dont au moins deux d'origines animales différentes) sont nécessaires. Les sensibilité, spécificité, reproductibilité de la méthode sont discutées et comparées à l'immunofluorescence, en analysant des souches pures et des extraits de tubercules.

La méthode décrite est utilisée pour suivre la contamination de la descendance de 15 variétés sur deux générations de tubercules. Une classification des ces variétés, en fonction de leur aptitude à transmettre l'agent pathogène à leur descendance, est proposée.

Summary

An ELISA method was developed to detectC. sepedonicum: three immunsera were needed, at least two from different animals. A relationship between bacterial suspension concentrations and optical density as determined by ELISA was established (Fig 1). The lower limit for detection was 10⁵ bacteria/ml which was similar to that obtained using IF. The relationship between ELISA and IF values determined simultaneously on different concentrations of the bacteria is given in Table 1. The specificity of ELISA and IF was tested on different bacteria pathogenic to Solanaceae species (Table 2). The optical densities obtained with healthy tuber extracts were 0; analyses of infected tubers showed not only the presence of whole bacterial cells but also of soluble antigens in the extracts (Table 3). When 1000 daughter tubers obtained from plants grown from inoculated seed tubers were examined, similar results were obtained using ELISA or IF in c. 90% of the tests (Table 4). The ELISA method was used subsequently to determine over two years the reaction of 15 potato cultivars initially inoculated withC. sepedonicum and planted in the soil. The cultivars could be divided on the basis of the percentage of contaminated daughter tubers into 11 susceptible to the pathogen, 2 slightly susceptible and 2 tolerant (Table 5).

Zusammenfassung

Der entwickelte ELISA-Test zur Bestimmung vonC. sepedonicum erfordert drei Immunoserums, wovon mindestens zwei von verschiedener Tierarten stammen. Es wird eine Relation zwischen der Konzentration der Suspensionen und ihrer optischen Dichte aufgestellt (Abb. 1). Die Bestimmungsgrenze befindet sich bei 10⁵ Bakterien/ml: diese ist identissch mit der Immunofluoreszenz-Methode (IF). Suspensionen von bekannten Konzentrationen welche simultan mit ELISA und IF bestimmt werden, ergeben die in der Tabble 1 aufgeführten Resultate. Die Spezifizität der ELISA und IF-Methoden wird bestimmt durch die Prüfung von verschiedenen pathogenen Bakterienarten auf Solanaceen (s. Tabelle 2). Tabelle 3 zeigt, dass die gesunden Knollen optische Dichten von null ergeben; die Analyse von befallenen Knollen ergibt nicht nur ganze Bakterien, aber auch aus den Extrakten auflösbare Antigenen, Einen auf 1000 Tochterknollen durchgeführten Test, von künstlich befallenen Mutterknollen stammend, gibt annähernd 90 Prozent Übereinstimmung der ELISA und IF-Ergebnisse (s. Tabelle 4).

Dieser ELISa-Test wird danach benützt um das Verhalten von 15 Kartoffelsorten zu testen, welche mitC. sepedonicum inokuliert und in Erde ausgepflanzt wurden. Der Versuch wurde auf zwei Jahre bezogen. Eine Klassierung nach prozentualem Befallsgrad der Tochterknollen wird aufgestellt: elf Sorten werden als anfällig, zwei wenig anfällig und zwei tolerant gegenüber dem Pathogen beurteilt (s. Tabelle 5).