Cellules adipeusesin situ et isolées Essai de fixation pour la microscopie électronique

Summary

During these past years, an increasing attention has been paid to the biochemical aspects of metabolic regulation in adipose tissue. An important advance has been that of the availability of a technique for the isolation of adipose cells without contamination by any other cellular component. As yet, morphological investigations have not kept up with biochemical ones, and little is known about the ultrastructural aspects of isolated adipose cells.

The present study describes the precautions required during the preparation of isolated adipose cells for study with the electron microscope. These cells are lipid “droplets” surrounded by an extremely thin cytoplasmatic layer and their fragility requires special precautions: 1. the cells must be carefully handled at all stages of preparation, avoiding mechanic or chemical trauma; 2. only small numbers of cells should be processed at any one time; 3. fixation requires a relatively high concentration of osmium to prevent continued partial solubility of the triglycerides in the solvents used for dehydration. It would seem that osmium modifies the solubility of triglycerides, probably through reaction at the level of the double bonds, perhaps facilitating cross-linkage between triglycerides at the level of the double bonds of the fatty acids involved; 4. either Vestopal or Epon can be used for embedding, Epon being somewhat easier to handle technically.

Isolated adipose cells resemble in most aspects cells fixedin situ, while presenting one added particularity. In the isolated, spherical fat cell, the fat droplet is isolated from the cytoplasm by a membrane, which is itself associated with numerous saccules of smooth endoplasmic reticulum along the cytoplasmic surface of the membrane.

Résumé

Au cours de ces dernières années, la recherche biochimique au niveau du tissu adipeux a pris un très grand développement. La technique d'isolement des cellules adipeuses a beaucoup contribué à accroître la connaissance de leur métabolisme, rendant plus nécessaire encore l'étude des corrélations existant entre les données biochimiques et l'aspect ultrastructural.

Ce travail porte sur la préparation de ce matériel pour l'observation au microscope électronique. Les cellules adipeuses sont des «gouttes» lipidiques recouvertes d'une fine couche de cytoplasme. La fragilité qui en résulte nécessite une préparation particulière: 1. les cellules doivent être maniées avec précaution tout au long de la préparation; 2. il faut fixer très peu de cellules à la fois; 3. cette fixation requiert une concentration élevée d'osmium, sans quoi les lipides de la cellule restent partiellement solubles dans les solvants employés pour la déshydratation. Il faut admettre que l'osmium modifie les propriétés de solubilité des triglycérides, probablement de par sa fixation au niveau des doubles liaisons, ou en facilitant une liaison en chaîne unissant les triglycérides entre eux par l'intermédiaire des doubles liaisons de leurs acides gras; 4. l'enrobage peut être fait au Vestopal ou à l'Epon, ce dernier étant techniquement plus maniable.

Isolées, les cellules adipeuses sont semblables aux cellules fixéesin situ. Les cellules adipeuses présentent une particularité: la gouttelette lipidique est isolée du cytoplasme par une membrane elle-même doublée du côté cytoplasmique par des saccules du reticulum endoplasmique lisse disposés parallèlement à elle.