Die Bestimmung der Nucleinsäuren inChlorella-Kulturen

Zusammenfassung

Der Einfluß der Extraktionsbedingungen auf die Bestimmung der Nucleinsäuren beiChlorella pyrenoidosa wurde untersucht. Hohe Temperaturen und Perchlorsäure-Konzentrationen beschleunigten die Extraktion, verursachten aber gleichzeitig beträchtliche Verluste an, colorimetrisch mit der Indol- und Diphenylreaktion bestimmbaren DNS-Komponenten. Darüber hinaus enthielten diese Extrakte groß Mengen von Kohlenhydrat- und Proteinspaltprodukten, welche bei der UV-Absorption und der colorimetrischen Bestimmung von RNS und DNS störten.

Zuverlässige Werte lieferte eine sechsstündige Extraktion des Zellmaterials bei 45°C mit 0,5 n Perchlorsäure und nachfolgende Bestimmung der RNS mit dem Orcintest und der DNS mit dem Diphenylamintest, ergänzt durch eine UV-Absorptionsmessung zur Kontrolle. Aus Polysacchariden stammende Glucose und Mannose verursachten einen Fehler bei der Orcinreaktion, der rechnerisch eliminiert werden konnte. Die Farbreaktionen zur DNA-Bestimmung zeigten sich empfindlich gegen hohe Perchlorsäure-Konzentrationen.

DaChlorella große Mengen Polyphosphate enthält, führte die Nucleinsäurebestimmung auf der Basis des Phosphatgehaltes der Extrakte zu keinen brauchbaren Ergebnissen.

Summary

Effects of extraction conditions on the estimation of nucleic acids inChlorella pyrenoidosa were investigated. High temperatures and concentrations of perchloric acid accelerated the extraction, but they also caused appreciable losses of DNA components detectable colorimetrically with the indole and diphenylamine reaction. Moreover the extracts contained great amounts of breakdown products of carbohydrates and proteins, which interfered in the estimation of RNA and DNA based on colour reactions and UV-absorption.

Reliable Results were obtained by extracting the cell material 6 hours at 45°C with 0,5 n perchloric acid and estimating RNA and DNA with the orcinol and diphenylamine reaction respectively, with an additional measurement of UV-absorption for control. The error in the orcinol reaction caused by mannose and glucose originating from polysaccharides could be eliminated arithmetically. Colour reactions for the estimation of DNA showed sensible against high concentrations of perchloric acid.

Estimation of nucleic acids based on phosphorus content of extracts did not yield reliable results because of the high content of polyphosphates of the organism.