Interactions between DNA-binding fluorochromes and mucopolysaccharides in agarose-diffusion test

Summary

Interactions between the two DNA-binding fluorochromes DAPI(4′,6-diamidino-2-phenylindole) und Hoechst 33258 (2-[2-(4-hydroxy-phenyl)-6-benzimidazolyl]-6-(1-methyl-4-piperazyl)-benzimidazole. 3 HCl) and certain mucopolysaccharides (heparin, sodium dextran sulphate 500, chondroitin sulphate and hyaluronic acid) were demonstrated when applying the agarose diffusion test.

The resulting reactions were observed with the naked eye and appeared as precipitation lines. Saponin, a glycoside, was included in these experiments because it led to intensive fluorescent nuclear envelopes when subsequently stained with DAPI. Comparing the two fluorochromes, DAPI achieved stronger reactions with heparin and dextran sulphate 500 whereas the Hoechst fluorochrome led to broader precipitation lines with hyaluronic acid, chrondroitin sulphate and saponin. Preliminary experiments also confirmed these interactions at the cellular level.

Zusammenfassung

Es werden Wechselwirkungen zwischen zwei DNS-bindenden Fluorochromen, DAPI (4′,6-diamidino-2-phenyl-indol) und Hoechst 33258 (2-[2-(4-hydroxy-phenyl)-6-benzimidazolyl-6-(1-methyl-4-piperazyl)-benzimidazol. 3 HCl) und bestimmten Mukopolysacchariden (Heparin, Natriumdextransulfat 500, Chondroitinsulfat und Hyaluronsäure) unter Verwendung des Agarose-Diffusionstestes beschrieben. Die resultierenden Reaktionen konnten makroskopisch abgelesen werden und zeigten sich als Präzipitationslinien. Saponin, ein Glykosid, wurde in die Experimente mit aufgenommen, weil es nach DAPI-Zusatz zu intensiv fluoreszierenden Kernmembranen führt. Vergleicht man die Aktivität der beiden Fluorochrome im Agarose-Diffusionstest, so ergeben sich mit DAPI stärkere Bindungen mit Heparin und Dextransulfat 500, während des Hoechst-Fluorochrom 33258 zu intensiveren Präzipitationslinien mit Hyaluronsäure, Chondroitinsulfat und Saponin führt. Eigene orientierende Versuche bestätigen die beschriebenen Wechselwirkungen auch unter Verwendung verschiedener Zellpräparationen.