Beitrag zur Methodik quantitativer Aktivitätsbestimmungen des Faktors IX

Zusammenfassung

Die vonEgli u.Schneider entwickelte, in einigen Punkten modifizierte Methode zur quantitativen Faktor IX-Aktivitätsbestimmung wurde auf ihre Eignung für das klinische Laboratorium geprüft. Zur Bestimmung der Normalaktivität wurde die Faktor IX-Aktivität von 30 Normalpersonen in kontaktaktiviertem Serum bestimmt. Die Umrechnung der Gerinnungszeiten (Sekunden) in Aktivitätsprozente der Norm erfolgte an Hand einer Eichkurve, die durch Verdünnungsreihen der Testseren erhalten wurde. Die Reproduzierbarkeit der erhaltenen Ergebnisse wurde durch mehrfache Untersuchung der Faktor IX-Aktivität im Serum einer Normalperson an verschiedenen Tagen geprüft. Dabei ergab sich eine hinreichend genaue Übereinstimmung der Werte.

Zu dem Problem der Methode, nämlich Normalplasma, das unter bestimmten Bedingungen gewonnen wurde, als „Plasma ohne Faktor IX-Aktivität“ im Testansatz zu verwenden, wurden folgende Untersuchungen vorgenommen:

• 1. Vergleichende Bestimmung der Faktor IX-Aktivität im Serum von 5 Normalpersonen unter Verwendung von „Plasma ohne Faktor IX-Aktivität“ und von Hämophilie B-Plasma. Wesentliche Unterschiede fanden sich dabei nicht.

• 2. Bestimmung der Faktor IX-Aktivität sowohl im Serum als auch im Plasma von 10 Normalpersonen bei Verwendung von „Plasma ohne Faktor IX-Aktivität“.

Die vonEgli u.Schneider entwickelte Methode gestattet weitgehend sichere quantitative Faktor IX-Aktivitätsbestimmungen in kontaktaktiviertem Serum und stellt weder bei der Gewinnung und Aufbereitung der benötigten Substrate noch im Zeitaufwand schwer erfüllbare Ansprüche an die Möglichkeiten eines klinischen Labors. Durch die Verwendung von Normalplasma als Faktor IX-freies Testsubstrat wird die Durchführung der Faktor IX-Aktivitätsbestimmung wesentlich erleichert. da auf das sonst notwendige und nur schwer zu erhaltende Hämophilie B-Plasma mit hochgradigem Faktor IX-Mangel verzichtet werden kann.

Summary

A method for the quantitative estimation of Factor-IX-activity, developed byEgli andSchneider, has been modified in certain details and tested for its adaptability to the conditions of a clinical laboratory. To find the normal activity, the Factor-IX-activity was determined in the contact-activated sera of 30 normal healthy persons. By continuous dilution of a test-serum a standard-curve was obtained, and this curve was used to convert the clotting-time (in seconds) into percentages of normal activity. By repeated estimations of the Factor-IX-activity in the serum of a healthy person on different days the reproducibility of the gained results was tested and was found to be sufficiently accurate.

To clarify the problem of the method, e. g. the use of normal plasma in the test, prepared according to strictly-defined conditions as “plasma without Factor-IX-activity”, the following investigations were made:

• 1. comparing the estimations of Factor-IX-activity in the serum of 5 healthy persons using a) “plasma without Factor-IX-activity”, b) Haemophilia-B-plasma.

• 2. estimation of Factor-IX-activity in the serum as well as in the plasma of 10 healthy persons, using the “plasma without Factor-IX-activity”.

Under these conditions no essential differences in the results were found. Thus the method, developed byEgli andSchneider, allows a fairly accurate estimation of Factor-IX-activity in contact-activated serum and neither the preparation of the necessary substrates nor the time involved are beyond the limits of the facilities of a clinical laboratory. By using normal plasma as “plasma without Factor-IX-activity”, the procedure of estimating the Factor-IX-activity in serum is essentially made easier, since the otherwise unavoidable use of Haemophilia-B-plasma, which almost totally lacks Factor-IX, and, after all, is difficult to obtain, is no longer necessary.