Skip to main content
SpringerLink
Log in

Die säulenchromatographische Fraktionierung der sauren Mucopolysaccharide im Harn

  • Originalien
  • Published:
Klinische Wochenschrift Aims and scope Submit manuscript

Zusammenfassung

Es wurde eine säulenchromatographische Methode beschrieben, die es gestattet, Heparitinsulfat (Heparansulfat) (HMS), Chondroitinsulfat A und C [Chondroitin-4-Sulfat (CSA), Chondroitin-6-Sulfat (CSC)], Chondroitinsulfat B (Dermatansulfat) (CSB) und Keratosulfat (Keratansulfat) (KS) deutlich voneinander zu trennen und einzeln colorimetrisch (z. B. mit der Carbazol- und/oder Anthron-Reaktion) zu bestimmen. Als Trägersubstanz diente Dowex 1 × 2. Die Elution erfolgte mit NaCl-Lösungen steigender Konzentration: 0,5 m, 1,25 m (HMS); 1,5 m (CSA, CSC); 2,0 m (CSB); 3,0 m (KS).

Die Vollständigkeit der Trennung wurde durch Bausteinanalyse der erhaltenen Elutionsgipfel (Bestimmung des Hexuronsäure-, Hexosamin-, Neutralzukkergehaltes) und Papierchromatographie geprüft und mit gereinigten sauren Mucopolysacchariden (SMP) verglichen.

Für die Anwendung der Dowex-Säulenchromatographie zur Ermittlung des SMP-Musters im menschlichen Harn wurde folgender Arbeitsgang vorgeschlagen: Dialyse des 24 h-Harnes gegen 0,9%ige NaCl-Lösung → Fällung der Gesamt-SMP mittels Cetyltrimethylammoniumbromid → Waschen des Präcipitates mit NaCl-gesättigten 95%igen Äthanol → DowexSäulenchromatographie → colorimetrische Bestimmung des Hexuronsäure- und Hexosegehaltes jeder Fraktion.

Bei Normalpersonen konnte mit dieser Methode HMS, CSA, CSB und KS im Harn nachgewiesen werden. CSA stellte die Hauptmenge dar.

Summary

A column chromatographic method using Dowex 1 × 2 is described which clearly separates heparitin sulfate (HMS), chondroitin sulfate A and C (CSA and CSC), chondroitin sulfate B (CSB) and keratosulfate (KS) from a mixture of acid mucopolysaccharides (AMPS). Subsequently, these compounds are individually measured by colorimetric assays.

The elution of AMPS is achieved by NaCl-solutions of increasing concentrations: 0,5 M, 1,25 M (HMS); 1,5 M (CSA, CSC); 2,0 M (CSB); 3,0 M (KS).

In order to examine the completeness of chromatographic separation aliquots of each peak were subjected to paper chromatography. The contents of hexuronic acid, hexosamine and neutral sugar were determined by appropriate color reactions and compared to values obtained with purified AMPS.

For the determination of AMPS patterns in normal human urine on the basis of the described Dowex column chromatography the following procedure was used: dialysis of 24h urine against normal saline → precipitation of total AMPS material with cetyltrimethylammoniumbromide → washing of precipitate with 95% ethanol saturated with NaCl → column chromatography on Dowex 1 × 2 → colorimetric determination of hexuronic acid and neutral sugar contents of each fraction.

Normal persons reveled an urinary excretion of HMS, CSA, CSB and KS, with CSA being the main compound.

This is a preview of subscription content, log in via an institution to check access.

Access this article

Log in via an institution

Price excludes VAT (USA)
Tax calculation will be finalised during checkout.

Instant access to the full article PDF.

Institutional subscriptions

Literatur

  • Balazs, E. A., andR. W. Jeanloz: The aminosugars, vol. IIa. New York and London: Academic Press 1965.

    Google Scholar 

  • Boas, N. F.: Method for the determination of hexosamines in tissues. J. biol. Chem.204, 553 (1953).

    Google Scholar 

  • Buddecke, E.: Untersuchungen zur Chemie der Arterienwand. V. Darstellung und chemische Zusammensetzung des Gefäßbindegewebes (Analysengang). Hoppe-Seylers Z. physiol. Chem.318, 33 (1960).

    Google Scholar 

  • Clausen, J., H. V. Dyggve, andJ. C. Melchior: Mucopolysaccharidosis. Paper electrophoretic and infra-red analysis of the urine in gargoylism and Morquio-Ullrich's disease. Arch. Dis. Childh.38, 364 (1963).

    Google Scholar 

  • Dische, Z.: A new specific color reaction of hexuronic acids. J. biol. Chem.167, 189 (1947).

    Google Scholar 

  • Dorfman, A.: Metabolism of acid mucopolysaccharides. Biophys. J.4, 155 (1964).

    Google Scholar 

  • Dorfman, A., andA. E. Lorincz: Occurrence of urinary acid mucopolysaccharides in the Hurler syndrome. Proc. nat. Acad. Sci. (Wash.)43, 443 (1957).

    Google Scholar 

  • Gardell, S.: The analysis of mucopolysaccharides. In:J. K. Grnat, The biochemistry of mucopolysaccharides of connective tissue. Biochemical Society Symposium No 20. p. 39. Cambridge: At the University Press 1961.

    Google Scholar 

  • Heremans, J. F., J. P. Vaerman, andM. Th. Heremans: Acid mucopolysaccharides of normal urine. Nature (Lond.)183, 1606 (1959).

    Google Scholar 

  • Hienz, H. A.: Die Pfaundler-Hurlersche Krankheit. Ergebn. allg. Path. path. Anat.40, 1 (1960).

    Google Scholar 

  • Knecht, J. C., andA. Dorfman: The heparitin sulfate—protein linkage in Hurler's syndrome. Fed. Proc.24, 606 (1965).

    Google Scholar 

  • Maroteaux, P., andM. Lamy: Hurler's disease, Morquio's disease, and related mucopolysaccharidoses. J. Pediat.67, 312 (1965).

    Google Scholar 

  • Meyer, K., M. M. Grumbach, A. Linker, andP. Hoffman: Excretion of sulfated mucopolysaccharides in gargoylism (Hurler's syndrome). Proc. Soc. exp. Biol. (N.Y.)97, 275 (1958).

    Google Scholar 

  • Meyer, K., andP. Hoffman: Hurler's syndrome. Arthr. and Rheum.4, 552 (1961).

    Google Scholar 

  • Pelzer, H., u.W. Staib: Steroidkonjugate I. Hochspannungs-Papierelektrophorese von 17-Ketosteroidkonjugaten. Clin. chim. Acta2, 407 (1957).

    Google Scholar 

  • Roe, J. H.: The determination of sugar in blood and spinal fluid with anthrone reagent. J. biol. Chem.212, 335 (1955).

    Google Scholar 

  • Schiller, S., G. A. Slover, andA. Dorfman: A method for the separation of acid mucopolysaccharides: Its application to the isolation of heparin from the skin of rats. J. biol. Chem.236, 983 (1961).

    Google Scholar 

  • Schmidt, H.: Fractionation of acid mucopolysaccharides on DEAE-sephadex anion exchanger. Biochim. biophys. Acta (Amst.)63, 346 (1962).

    Google Scholar 

  • Spolter, L., andW. Marx: Paper chromatography of heparin and related sulfated mucopolysaccharides. Biochim. biophys. Acta (Amst.)38, 123 (1960).

    Google Scholar 

  • Teller, W.: Die Ausscheidung saurer Mucopolysaccharide im menschlichen Harn. Mschr. Kinderheilk.112, 538 (1964).

    Google Scholar 

  • Varadi, D. P., J. A. Cifonelli, andA. Dorfman: Acid mucopolysaccharides in normal urine. Fed. Proc.22, 412 (1963).

    Google Scholar 

Download references

Author information

Authors and Affiliations

  1. Universitäts-Kinderklinik Marburg a. d. Lahn, Germany

    W. Teller & A. Ziemann

Authors
  1. W. Teller
    View author publications

    You can also search for this author in PubMed Google Scholar

  2. A. Ziemann
    View author publications

    You can also search for this author in PubMed Google Scholar

Additional information

Mit dankenswerter Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft, Bad Godesberg.

Auszugsweise vorgetragen auf der 3. Arbeitstagung für pädiatrische Forschung, Marburg a. d. Lahn, 25./26. Februar 1966.

Rights and permissions

Reprints and permissions

About this article

Cite this article

Teller, W., Ziemann, A. Die säulenchromatographische Fraktionierung der sauren Mucopolysaccharide im Harn. Klin Wochenschr 44, 1142–1147 (1966). https://doi.org/10.1007/BF01745540

Download citation

  • Issue Date:

  • DOI: https://doi.org/10.1007/BF01745540

Search

Navigation