Quantitation of carbohydrate sweeteners and organic acids in human oral fluid using HPLC analysis

Summary

A sensitive high performance liquid chromatography (HPLC) assay was developed for the qualitative and quantitative determination of carbohydrate sweeteners and organic acids in oral fluid. To separate these compounds, an ion-moderated partition resin HPLC column (Aminex HPX-87H) was used. All components of the HPLC system were interconnected using stainless steel capillary tubing. Isocratic elution with 0.01 N sulfuric acid provided the profile of both compound classes. The compounds were detected using a refractive index detector. The method employed computerized data collection and integration (Omega-2 system) with a detection sensitivity of 0.1 µg compound per HPLC assay (80 µl). This method is useful in caries research, because it detects minute amounts of sugars and organic acids in oral fluid during clearance studies of various foods in the mouth.

Zusammenfassung

Eine empfindliche HPLC-Methode wurde für die qualitative und quantitative Analyse von Kohlehydraten und organischen Säuren in Mundflüssigkeiten (Speichel und Zahnplaque) entwickelt. Für die Trennung dieser Verbindungen wurde eine Aminex HPX-87H (Bio-Rad) Chromatographie-Säule verwendet. Alle Komponenten des HPLC-Systems waren mit Edelstahl-Kapillaren verbunden. Die isokratische Elution beider Verbindungs-Klassen erfolgte mit 0,01 n Schwefelsäure. Alle Verbindungen wurden mit einem RI-(Refraktion-Index-) Detektor gemessen. Die Ergebnisse wurden mit einem PC-gestütztem Auswertesystem automatisch gesammelt und integriert. Die zeitbedingte Abnahme der Konzentration von Kohlehydraten im Munde einerseits und die Produktion von organischen Säuren durch Bakterien der Mundhöhle andererseits können mit dieser empfindlichen HPLC-Methode bis zu einer Genauigkeit von 0,1 µg Substanz per Analyse (80 µl) bestimmt werden.