Zur Präparation von Blut- und Knochenmarkzellen für die Impulszytophotometrie

Zusammenfassung

Aus dreijähriger Erprobung in einem klinisch hämatologischen Labor ergab sich eine einfache Methode der Zellpräparation von Blut und Knochenmark, mit der die Impulszytophotometrie zur Gewinnung von DNS-Histogrammen als Routineverfahren möglichst ausgenutzt wird. Ein Hauptziel der Autoren ist dabei die kurzfristige Kontrolle von zellkinetischen Effekten der Leukämiebehandlung für Wahl und Zeitpunkt der weiteren Therapie. 0,5 bis 1 ml heparinisiertes Venenblut oder Sternalpunktat werden zur Hämolyse für 20 min in 10 ml Leitungswasser suspendiert. Die Probe kann in 35% Äthanol im Kühlschrank aufbewahrt werden. Nach 20 bis 30 min Färbung von 1 ml der Probe in 20 ml Ethidiumbromidlösung (10 mg/l phys. Kochsalzlösung) erfolgt die Messung von 500 Zellen/sec. Einflüsse durch Erythrozyten, Zellverklebungen und eine Koinzidenzrate von mehr als 1% der Zellen werden vermieden. Das DNS-Histogramm 1 h nach Entnahme der Probe vom Patienten ergibt genaue Werte der Anteile von Zellen in Stadien der Proliferation bzw. der S-Phase und (G₂+M)-Phase.

Summary

A simple method is proposed for preparing hematologic material for pulse cytophotometry, including 1) treatment for hemolysis of up to 1 ml heparinized blood or aspirated bone marrow in 10 ml of tap water for 20 minutes, 2) storing of the suspension at +6°C after dilution in ethanol (35%), 3) staining of 1 ml of this dilution in 20 ml ethidiumbromide (10 mg/1000 ml saline) for 20 min and measuring at a rate of 500 cells per sec. Disturbing effects by red cells and by clustering of nucleated cells are avoided by this procedure. The registration of DNA-histograms of high accuracy in measurement is possible within 1 hr. The coincidence rate does not exceed 1% of the cells. Resulting from the three years experience in a hematologic laboratory the technic described is very useful especially for the possibilities of pulse cytophotometry in clinical routine and in the control and arrangement of leukemia treatment.