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Herstellung und Eigenschaften hochgereinigter Vaccinevirus-Suspensionen

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Zusammenfassung

Ein einfaches Verfahren zur Reinigung des Vaccinevirus wird beschrieben. Das Virus wird auf der Kaninchenhaut zur Vermehrung gebracht, durch Zentrifugieren gewaschen und anschließend in einer Emulsion aus Puffer und Frigen 113 gefällt. Aus dem Emulgat lassen sich mit Puffer kolloidhaltige, stabile Suspensionen eluieren mit Wasser kolloidfreie, instabile Fraktionen von sehr hohem Reinheitsgrad. Etwa ein Drittel des Ausgangsmaterials wird als gereinigtes Virus erhalten. Die einzelnen Reinigungsschritte werden elektronenmikroskopisch kontrolliert und an Hand von Partikelzählungen und Trockengewichts-bestimmungen quantitative Angaben gemacht.

Das gereinigte Virus besitzt normale biologische Qualität; die älteren Werte der Literatur für DNA- und Proteingehalt wurden bestätigt. Aus elektronenmikroskopischen Messungen resultierte für den dehydratisierten Elementarkörper ein Volumen von 8, 37·10−15 cm3; seine Dichte ergibt sich zu 0,68g/cm3, die mittlere Dichte der Bauelemente zu 1,31g/cm3. Die mittlere Masse des dehydratisierten Elementarkörpers bestimmten wir zu 5,69·10−15g.

Summary

A simple method for the purification of vaccinia virus is described. Virus from the rabbit skin is washed by centrifugation and dispersed in an emulsified mixture of buffer and Frigen (Freon) 113. After centrifugation elution of the Frigen-layer with buffer yields colloid-containing stable virus suspensions. Water elution results in colloid-free but unstable fractions of high purity. About one third of the original virus material is obtained in pure form. The steps of purification are checked by using electron microscopy. Particle counting and dry weight determinations provided quantitative data.

The biological quality of the purified material is normal. Former data of viral DNA and protein were confirmed. On the basis of electron microscopic measurements it is concluded that the dehydrated elementary body of vaccinia, virus has a volume of 8,37 · 10−15 cm3 and a density of 0,68 g/cm3 while the average density of the dry subunits is 1, 31g/cm3. The median weight of the dehydrated elementary body was found to be 5, 69·10−15g.

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Abbreviations

CAM:

Chorioallantoismembran

DNA:

Desoxyribonucleinsäure

DNase:

Desoxyribonuclease

EB:

Elementarkörper

PFU:

pockenbildende Einheit

RNA:

Ribonucleinsäure

RNase:

Ribonuclease

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Authors and Affiliations

  1. Abteilung für Virusforschung, Bernhard-Nocht-Institut für Schiffs- und Tropenkrankheiten, Hamburg

    Jürgen Marquardt, Rudolf Geister & Dietrich Peters

Authors
  1. Jürgen Marquardt
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  2. Rudolf Geister
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  3. Dietrich Peters
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Additional information

Der Deutschen Forschungsgemeinschaft danken wir für die Unterstützung dieser Arbeit, Herrn Dr.G. Nielsen für die Haemagglutinin-Bestimmungen.

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Marquardt, J., Geister, R. & Peters, D. Herstellung und Eigenschaften hochgereinigter Vaccinevirus-Suspensionen. Archiv f Virusforschung 12, 561–578 (1963). https://doi.org/10.1007/BF01246381

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  • DOI: https://doi.org/10.1007/BF01246381

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