Methode zur photometrischen Mikrobestimmung kleiner Mengen β-Naphthol in Gegenwart eines großen Über-schusses verschiedener β-Naphthylester-Emulsionen und deren Verwendung zur Bestimmung der „Aromatischen Esterase’ in biologischem Material

Zusammenfassung

Es wird eine exakte Methode zur Bestimmung von β-Naphthol-Fettsäure-Ester spaltenden Fermenten in beliebigem biologischen Material dargestellt. Sie basiert auf einer Bestimmung von freiem β-Naphthol in Gegenwart eines großen Überschusses von Emulsionen von β-Naphthylestern. Die bisher dazu erschienene Literatur wird im Hinblick auf die Methodik kritisch gesichtet und nachgewiesen, daß mit einer Ausnahme in allen bisher bekanntgewordenen Arbeiten mindestens vier prinzipielle Fehlerquellen enthalten sind: Methodische Fehler bei der photometrischen Analyse, Gehalt der Substrate an stark hemmenden organischen Lösungsmitteln, Außerachtlassung der Teilchengröße und starke Instabilität der verwendeten Substrate aus Mangel an Schutzkolloiden und Stabilisatoren (Zerfall der Substrate während der Bebrütung). Alle aufgefundenen Fehler werden in der hier vorliegenden Methode vermieden. Außerdem wird die quantitative Bestimmung der Wirkung zugesetzter Substanzen auf die Aktivität der β-Naphthylester spaltenden aromatischen Esterasen beschrieben. Diese Wirkung wird in Prozent der stets mitbestimmten Normalspaltung, die 100% gleichgesetzt wird, angegeben. Die Methode ist allgemein gehalten, sie kann zur Untersuchung beliebiger Fermente, die Pettsäureester des β-Naphthols spalten, verwendet werden und je nach den Erfordernissen im Hinblick auf pH-Wert, Art des verwendeten β-Naphthylesters, Konzentration des Substrates usw. sofort den geforderten Gegebenheiten angepaßt werden.

Summary

A precise method is presented for the determination of ferments which cleave β-naphthol-fatty acid-esters in any selected biological material. It is based on a determination of free β-naphthol in the presence of a large excess of emulsions of β-naphthyl esters. The previous pertinent literature was critically reviewed from the standpoint of methodology and it is found that with one exception all of the published methods contain at least four fundamental sources of error: methodical errors in the photometric analysis, content of strongly inhibiting organic solvents in the substrate, neglect of the particle size and pronounced instability of the substrates to be used due to lack of protective colloids and stabilizers (decomposition of the substrates during the incubation). All of the detected errors are avoided in the present method. Furthermore, a description is given of the quantitative determination of the action of added substances on the activity of the esterases splitting the β-naphthyl esters. This action is reported in percent of the normal splitting which is always also determined and which is taken as 100%. The method is kept in general terms, it may be employed for the study of any ferments whatsoever which split the fatty acid esters of β-naphthol, and it can be immediately adapted to meet the given circumstances, such as the requirements with regard to the pH value, the kind of β-naphthyl ester employed, concentration of the substrate, etc.

Résumé

On décrit une méthode exacte pour doser les ferments qui permettent de séparer les esters d'acides gras du β-naphtol dans une substance biologique quelconque. Elle est fondée sur un dosage du β-naphtol libre en présence d'un gros excès d'émulsions d'esters β-naphtyliques. On a examiné d'un esprit critique du point de vue de la méthode, la littérature publiée jusqu'à maintenant sur ce sujet et l'on montre qu'il y a dans tous les travaux connus jusqu'ici, à l'exception d'un seul, quatre sources principales d'erreurs: les erreurs dues à la méthode même, pour l'analyse photométrique, la teneur des substrats en solvants organiques qui empêchent fortement le déroulement d'un procédé chimique, le fait que l'on ne se préoccupe pas de la taille des particules et une forte instabilité des substrats utilisés, due à l'absence de colloïdes protecteurs et de stabilisateurs (décomposition des substrats pendant l'incubation). Dans la méthode présentée, on élimine toutes les erreurs trouvées. De plus, on décrit la détermination quantitative de l'action des substances ajoutées, sur l'activité des estérases aromatiques qui séparent les esters naphtyliques. On donne cette action en pour cent de la séparation normale toujours déterminée en même temps, que l'on pose égale à 100%. C'est une méthode générale; elle peut être utilisée pour la recherche de ferments quelconques qui séparent les esters des acides gras du β-naphtol et qui peuvent être adaptés tout de suite aux données exigées, en tenant compte de la valeur du ph, de la catégorie de l'ester β-naphtylique utilisé, de la concentration du substrat, etc.