Die Trennung und Analyse von Aminosäuren im Ultramikromaßstab

Zusammenfassung

Die Trennung von Aminosäuren an temperierten Dowex 50 x 8-Mikrosäulen mit 3 mm Innendurchmesser wird beschrieben. Die sauren und neutralen Aminosäuren werden mittels Gradientenelution mit einem Natriumcitratpuffer pH 3,2, in den eine 2,5-m Natriumacetatlösung einfließt, eluiert. Die basischen Aminosäuren werden an einer 50 cm langen Mikrosäule mit einem Natriumcitratpuffer pH 6,0 getrennt. Ohne Anwendung von Druck dauert die Trennung der sauren und neutralen Aminosäuren 40 Stunden, die basischen Aminosäuren werden in 9 Stunden eluiert. Die optimale Bestimmbarkeit liegt je Aminosäure bei 5 bis 10μg, bzw. 100 μg Protein. Die aus je 0,25 ml bestehenden Eluatfraktionen werden mit durch Natriumdithionit partiell reduziertem Ninhydrin analysiert und die Blaufärbung in Mikroküvetten gemessen.

Summary

The separation of amino acids on tempered Dowex 50 x 8 micro columns with internal diameter of 3 mm is described. The acid and neutral amino acids are eluted by gradient elution by means of a sodium citrate buffer ph 3.2, into which flows a 2.5M sodium acetate solution. The basic acids are separated with a sodium citrate buffer ph 6.0 on a 50-cm micro column. If no pressure is used, the separation of the acid and the neutral amino acids requires 40 hours, the basic amino acids are eluted in 9 hours. The optimal determinability for the respective amino acids is 5 to 10 μg. The eluate fractions each consisting of 0.25 ml are determined by means of ninhydrin partially reduced with sodium dithionate and measured in micro cuvettes.

Résumé

On décrit la séparation d'amino-acides sur microcolonnes Dowex 50 x X 8 tempérées, de diamètre intérieur 3 mm. Les amino-acides sous forme neutre et acide subissent une élution graduelle avec un tampon pn 3,2 au citrate de sodium, qui s'écoule dans une solution d'acétate de sodium 2,5M. On sépare les amino-acides sous forme basique sur une microcolonne de 50 cm de long avec un tampon PH 6,0 au citrate de sodium. Sans appliquer de pression, la séparation des amino-acides sous forme neutre et acide dure 40 heures; les amino-acides sous forme basique sont élues en 9 heures. Le meilleur domaine de dosage des amino-acides se situe entre 5 et 10 μg. On dose les fractions d'éluat de 0,25 ml par la ninhydrine partiellement réduite par le dithionite de sodium et l'on détermine leur volume dans des micro-fioles.