A colorimetric assay for the enzymic determination of sialic acid in milk

Ein colorimetrischer Test für die enzymatische Bestimmung der Sialsäure in Milch

Zusammenfassung

Es wird ein colorimetrischer Test für die routinemäßige enzymatische Bestimmung der freien Sialsäure in Milch vorgeschlagen. Dabei wird Sialsäure inN-Acetyl-d-Mannosamin und Pyruvat durchN-Acetylneuramin-Säurealdolase getrennt; der Pyruvatgehalt wird mit der Lactatdehydrogenase in Anwesenheit von NADH durch die Änderung der Absorption bei 340 nm gemessen. Die Methode zeigte eine gute Korrelation mit der chemischen Methode (r=0,988), eine hohe Rückgewinnung (98,0%) und Wiederholbarkeit (S r : 0,5–0,6 mg/L) sowie eine hohe Genauigkeit (S y,x =0,28 mg/L). Dieser Test kann bei der routinemäßigen Analyse von Milch als Indikator der Qualität des Rohstoffes bei der UHT-Milchproduktion nützlich sein. Der normale Bereich ist 9,0±4,0 mg/L (mittlerer quadratischer Fehler;n=41). Schlußfolgerungen aus der Ausgangskonzentration der freien Sialsäure im Rohstoff zur Bestimmung der Qualität sind nicht ohne weiteres möglich, wenn die Intensität des Erhitzungsprozesses nicht bekannt ist.

Summary

A colorimetric assay for routine enzymic determination of free sialic acid in milk is proposed. Sialic acid is cleaved intoN-acetyl-d-mannosamine and pyruvate byN-acetylneuraminic acid aldolase; the pyruvate content is measured by lactate dehydrogenase in the presence of NADH, as a change of absorbance at 340 nm. The proposed method showed good correlation with the chemical method (r=0.988), high recovery (98.0%) and repeatability (S r =0.5–0.6 mg/L) as well as high accuracy (S y,x =0.28 mg/L). The assay may be useful for routine analysis of milk, as an indicator for the quality of the raw material to be used for production of UHT milk. The normal value range is 9.0±4.0 mg/L (mean±standard deviation;n=41). Conclusions about the initial concentration of the free sialic acid in the raw material, in order to obtain an idea of the quality, cannot readily be drawn from determinations in UHT milk without knowledge of the severity of the heating process.

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Mottar, J., Merchiers, M., Vantomme, K. et al. A colorimetric assay for the enzymic determination of sialic acid in milk. Z Lebensm Unters Forch 192, 36–39 (1991). https://doi.org/10.1007/BF01201439

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Keywords

  • Pyruvate
  • NADH
  • Lactate Dehydrogenase
  • Sialic Acid
  • Colorimetric Assay