Determination of flavone C-glycosides in tea

Zusammenfassung

Zur Bestimmung der Flavon-C-glykoside im Tee wurde eine HPLC-Methode ausgearbeitet. Bei der Probenaufarbeitung wurde zuerst ein wäßriger Aufguß durch Polyamid-Säulenchromatographie gereinigt. Anschließend erfolgte eine enzymatische Hydrolyse der O-glykosidischen Flavonoide und eine zweite Reinigung über Polyamid-Säulenchromatographie. Mit Hilfe der HPLC an einer Umkehrphase mit Gradientenelution und Dioden-Array-Detektion gelang die Trennung von insgesamt 8 Flavon-C-glykosiden. 7 Flavon-C-glykoside wurden mittels präparativer HPLC isoliert. Die Identifizierung erfolgte durch Cochromatographie, UV-Spektroskopie,¹H- und¹³C-NMR-Spektroskopie (ein- und zweidimensional) und FAB(Fast Atom-Bombardment)-Massenspektrometrie. Die Isomerenpaare Apigenin-6-C-glucosyl-8-C-arabinosid (Schaftosid) und Apigenin-6-C-arabinosyl-8-C-glucosid (Isoschaftosid) sowie Luteolin-8-C-glucosid (Orientin) und Luteolin-6-C-glucosid (Isoorientin) konnten erstmals im Tee nachgewiesen werden. Bei den drei anderen Substanzen handelte es sich um Apigenin-8-C-glucosid (Vitexin), Apigenin-6-C-glucosid (Isovitexin) und Apigenin-6,8-di-C-glucosid (Vicennin-2), deren Vorkommen im Tee bereits bekannt war. Ein weiteres Flavon-C-glykosid konnte anhand des UV-Spektrums den Apigeninglykosiden zugeordnet werden. Die Flavon-C-glykoside wurden in 16 schwarzen und 2 grünen Tees verschiedener Anbäugebiete sowie in einem Oolong-Tee quantitativ bestimmt. Die Gesamtgehalte bewegten sich zwischen 0,48 und 2,69 g/kg i.Tr. Die Luteolinglykosidgehalte lagen in allen Fällen weit unterhalb der Gehalte der identifizierten Apigeninglyko-side. Bei den meisten schwarzen Tees wurde unabhängig von der Herkunft ein ähnliches Flavon-C-glykosid-muster beobachtet. Lediglich ein chinesischer und ein indonesischer schwarzer Tee sowie die beiden grünen Tees zeigten eine andere Verteilung der Flavon-C-glykoside. Herkunftsspezifische Charakeristika konnten anhand dieser Ergebnisse nicht festgestellt werden. In Hydrolysaten von höhermolekularen Polyphenolfraktionen (Mr>5000) aus Schwarzteeaufgüssen konnten geringe Mengen an Flavon-C-glykosiden (1,2–2,2 mg/g der isolierten Fraktion) nachgewiesen werden.

Abstract

An HPLC method for the determination of flavone C-glycosides (FCG) from black tea has been developed. Sample clean-up was accomplished by means of polyamide column chromatography, followed by enzyme hydrolysis of interfering compounds such was flavonol glycosides and a second polyamide column Chromatographic step. Using HPLC with gradient elution and photodiode array detection eight FCG were separated. Seven FCG were isolated by means of preparative HPLC. Identification was carried out using co-chromatography, FAB(Fast Atom Bombardment)-mass spectrometry and various nuclear magnetic resonance techniques. Apigenin 6-C-glucosyl-8-arabinoside (schaftoside) and apigenin 6-C-arabinosyl-8-C-glucoside (isoschafto-side) as well as luteolin 8-C-glucoside (orientin) and luteolin 6-C-glucoside (isoorientin) have been detected in tea for the first time. Three of the other compounds have been identified as apigenin 8-C-glucoside (vitexin), apigenin 6-C-glucoside (isovitexin) and apigenin 6,8-di-C-glucoside (vicenin-2). Their occurrence in tea has been previously reported. From its UV spectrum another compound was concluded to be an apigenin glycoside. The FCG were quantified in a variety of teas of different origins (16 black, two green and one oolong). The total amounts of the FCG were 0.48–2.69 g/kg dry weight. The FCG pattern of teas of different origins were similar to each other and no origin-dependent characteristics have yet been observed. Small amounts of FCG (1.2–2.2 mg/g) were detected in hydrolysates of high relative molecular mass fractions (Mr>5000) of a black tea liquor.