Hippurathydrolase, ein neues Enzym aus Mikroorganismen, 2. Mitt.: Enzymeigenschaften

Zusammenfassung

Als charakteristische Eigenschaften des neu aufgefundenen Enzyms Hippurathydrolase werden festgestellt:

• 1. Die Hydrolyse von Hippursäure und ähnlich aufgebauten N-Benzoylaminosäuren verläuft mit Hippurathydrolase bis zu hohen Umsätzen nach einer Reaktion nullter Ordnung, bez. auf das Substrat. Die spezif. Enzymaktivität wurde bei 37° C und pH 7,5 zu 7,4 μMol Hippurat/Min. · mg Enzymprotein ermittelt. DieMichaelis-Konstante für die Hydrolyse von Hippurat beträgt 5,5·10⁻⁴ Mol/l bei 5° C und pH 7,5.

• 2. Der optimale pH-Bereich der enzymatischen Hydrolyse von Hippurat liegt bei pH 7,5.

• 3. Die optimale Temperatur der Enzymwirkung ist bei kurzdauernden Spaltungsversuchen 60° C, doch wird bei dieser Temp. die Grenze der Enzymstabilität in Gegenwart des Substrates erreicht. In Abwesenheit von Substrat wird das Enzym bei 60° C innerhalb 15 Min. völlig inaktiviert. Die enzymat. Aktivität ist wenig temperaturabhängig (Q ₁₀=1,17−1,07); im untersuchten Bereich von 20 bis 60° C wurde für die enzymatische Hydrolyse von Hippurat eine Aktivierungsenergie von 2700 cal/Mol bestimmt.

• 4. HgCl₂ und Parachlormercuribenzoat (PCMB) inaktivieren das Enzym. Die Hemmwirkung vonPCMB (10⁻⁴ m) kann durch Cystein (10⁻²–10⁻¹ m) nicht aufgehoben werden. 8-Hydroxychinolin undEDTA hemmen die Enzymwirkung; eine Beteiligung von Metallionen an der katalytischen Funktion von Hippurathydrolase wurde jedoch nicht nachgewiesen.

Abstract

Characteristic properties of the new enzymehippurate hydrolase are reported:

• 1. The Michaelis constant for hippurate hydrolysis is 5.5·10⁻⁴ mole/l at 5° and pH 7.5. The specific activity of the purified enzyme preparation is 7.5 μmole/minute · mg enzyme protein at 37° and pH 7.5. The pH optimum is 7.5.

• 2. The effects of temperature on the reaction rate and on the stability of the enzyme were determined.

• 3. The effects of various inhibitors (HgCl₂, pCMB, EDTA, 8-hydroxyquinoline) and cations were studied. Participation of metal ions in the catalytic function ofhippurate hydrolase was not detectable.