Identifizierung und Bestimmung von Sulfonamiden in Geweben und Serum von Schlachttieren mittels Hochleistungsdünnschicht- und Hochdruckflüssigkeitschromatographie

Summary

A thin-layer chromatographic screening method on HPTLC plates for differentiation and determination of 23 different sulfonamides in muscle, kidney and serum of slaughter animals is presented. Interfering substances from tissue homogenates were separated either by diafiltration of aqueous extracts prior to or subsequent to the extraction with alkylacetate and respectively by means of centrifiltration of serum after adding sodium dodecylsulphate. The absence of interfering substances is shown on plates with and without sulfonamides as well as by chromatograms after high pressure liquid chromatography (RP 18;λ = 260 nm) of 4 different sulfonamides. The sulfonamides were derivatized after chromatography on plates by spraying a solution of fluorescamine. Suspicious samples from food surveillance were successfully analyzed according to their sulfonamide patterns, the amount of individual sulfonamide compounds present were quantified by measurements of fluorescence remission. A number of developing solvents for application either in one-dimensional or two-dimensional chromatographic mode of the linear developing chamber is proposed. The recovery of added sulfonamides at levels of 100, 200 or 300 nanograms/g tissue or 50 nanograms/ml serum depends on the respective compound and was found to range well reproducibly for each compound between 9 and 50% for the examined 5 sulfonamides of different pK _a values. The lower detection limit in tissues was for the compound with the lowest recovery 50 ppb, in all other cases to 10 ppb. Using 0.5 ml of serum centrifltrate it amounts to 5 ppb.

Zusammenfassung

Es wird über ein diinnschichtchromatographisches Auswahl-Verfahren auf HPTLC Platten zur Differenzierung und Bestimmung von 23 verschiedenen Sulfonamiden aus Muskulatur, Niere und Serum von Schlachttieren berichtet. Die Abtrennung interferierender Substanzen aus Gewebehomogenaten erfolgte mittels Diafiltration wäßriger Extrakte vor oder nach der Extraktion mit Alkylacetat bzw. aus Serum mittels Zentrifltration nach Zusatz von Natriumdodecylsulfat. Die Abwesenheit interferierender Substanzen zeigte sich außer nach ein- bzw. zweidimensionaler Trennung und Derivatisierung der Sulfonamide durch Besprühen mit einer Fluorescamin-Lösung auch nach hochdruckflüssigkeitschromatographischer Analyse (RP 18;λ = 260 nm) von 4 verschiedenen Sulfonamiden in Muskelextrakten. In Verdachtsproben aus der Lebensmittelüberwachung wurden sowohl die darin enthaltenen Sulfonamidmuster erfolgreich diffe enziert als auch einzelne Sulfonamide durch Fluorescenzremissionsmessung quantifiziert. Sowohl für die eindimensionale als auch die zweidimensionale Chromatographie werden eine Reihe von optimierten Laufmittelsystemen zur Verwendung in der Linearentwicklungskammer vorgeschlagen. Die Wiederfindungsraten für Sulfonamide bei Zugabe von 100 bis 300 Nanogramm/g Gewebe bzw. 50 Nanogramm/ml Serum sind substanzabhängig und wurden für insgesamt 5 verschiedene Sulfonamide mit unterschiedlichen pK _a-Werten jeweils gut reproduzierbar zwischen 9 und 50% gefunden. Die untere Nachweisgrenze in Gewebe lag für das Sulfonamid mit der geringsten Wiederfindung bei 50 ppb, für die übrigen darunter bis 10 ppb. Für Serum liegt sie bei Verwendung von 0,5 ml Zentrifiltrat bei 5 ppb.