Bestimmung der einzelnen Purin- und Pyrimidinbasen aus proteinreichen Lebensmitteln nach hydrolytischem Aufschluß durch automatische lonenaustauscherchromatographie

Summary

A method was developed for the separation and quantitative determination of purine and pyrimidine bases liberated from food nucleic acids, nucleotides and nucleosides. After acid hydrolysis of nucleotide polymers to the free bases and simultaneous splitting of the proteins in a pressure digestion vessel, the bases were separated by gradient elution on two different cation exchange resins. The Internal Standard Method was used for identification and quantitative determination, by adding a non-natural purine base, continuously monitoring the UV-measurement at λ = 260 nm and integrating it electronically.

Furthermore the eluted bases were fractionally collected, which meant purest isolation of the peaks, and identified by UV-spectrophotometry and/or other chromatographic methods (TLC, GLC). In this way, because of the high elution flow and the high capacity of the separation column, considerable amounts, up to 200 μg of each compound could be separated and isolated.

Zusammenfassung

Eine Methode zur Auftrennung und quantitativen Bestimmung der in Lebensmitteln aus Nucleinsäuren, Nucleosiden oder Nucleosiden freigesetzten und freien Purin- und Pyrimidinbasen wurde ausgearbeitet. Nach saurer Hydrolyse der Nucleotidpolymeren bis zu den freien Basen bei gleichzeitiger ausreichender Proteinspaltung in einem Druckaufschlußgefäß wurden die Basen durch stufenweise Elution an zwei verschiedenen Kationenaustauscherharzen getrennt. Die Identifizierung und quantitative Bestimmung erfolgte mittels kontinuierlich registrierender UV-Messung bei λ = 260 nm. Die Auswertung wurde nach dem Verfahren des Internen Standards mit Hilfe einer in der Natur nicht vorkommenden Purinbase durch elektronische Integration vorgenommen. Zusätzliche Identifizierungen der eluierten Basen konnten durch Fraktionssammlung und damit Reinstisolierung der Peaks mittels UV-Spektralphotometrie oder anderer chromatographischer Methoden (DC, GC) durchgeführt werden, da aufgrund des hohen Elutionsflusses und der hochkapazitiven Trennsäule erhebliche Substanzmengen (bis zu 200 μg je Einzelkomponente) getrennt werden konnten.