The efficacy of neuraminidase treatment in studies on red cell aging

Zusammenfassung

Es wurde ein in vitro-System entwickelt, in dem die Tendenz von Rattenerythrozyten (RE) gemessen wurde, entweder nach einer in vivo-Alterung oder einer in vitro-Oberflächenveränderung durch homologe peritoneale Makrophagen phagozytiert zu werden. Wurden „alte“, dichtere RE in Fraktionen auf Basis ihrer Dichte aufgetrennt, so war die Phagozytose von „alten“ RE wesentlich ausgeprägter als jene von „jüngeren“ Zellen. Die Neuraminidase-Behandlung von RE führte zu einer hochgradigen Phagozytose im Vergleich zu den Normalkontrollen der gesamten Zellpopulation oder „alten“ Zellen. Eine Galaktose-Oxydase-Behandlung von neuraminidasebehandelten RE brachte keinen Schutz gegenüber den Makrophagen. Im Gegensatz dazu führte die Behandlung von RE mit Neuraminidase, die an Sepharose-4B festgebunden ist, zwar zu einer Entfernung bis zu ∼25% der gesamten membrangebundenen Neuraminsäure, ergab jedochkeine über den Kontrollwerten liegende Phagozytose. Daraus folgt, da\ man bei der Interpretation von Experimenten mit Neuraminidase sehr vorsichtig sein mu\, wenn das Enzym dafür verwendet werden soll, künstlich „gealterte“ RE zu erzeugen.

Summary

An in vitro system was developed to test the propensity of rat erythrocytes (RBC) toward phagocytosis by homologous peritoneal macrophages after in vivo aging or after in vitro surface modification. “Old” RBC obtained from erythrocyte populations separated into fractions on the basis of their density were found to be phagocytosed to a significantly greater extent than cells obtained from “young” cell fractions. Neuraminidase treatment of RBC resulted in extensive phagocytosis in comparison to control cells representing the whole population or “old” cells. Galactose oxidase treatment of neuraminidase treated RBC afforded no protection from uptake by macrophages. In contrast, treatment of RBC with neuraminidase immobilized on Sepharose 4B, leading to removal of up to ∼25% of the total membrane sialic acid, did not lead to phagocytosis above control values. These results indicate that extreme caution is necessary in the interpretation of experiments in which neuraminidase is utilized to produce simulated “aged” RBC.